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有关荧光激发光谱和发射光谱的问题。
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大家好！我刚接触荧光分光光度法不久，激发光谱和发射光谱存在一些疑问，参阅了一些参考书和文献，但还是感觉没懂透彻，现将我自己的理解表述如下，请大伙帮我看看是否理解正确。谢谢！ 1、激发光谱：由于光谱是量子化的，所以每个激发峰对应于一个激发态的振动能级，而这个激发峰的纵坐标则反映了到达这个振动能级的电子数目的多少，或者说概率的大小。比如说激发波长在300nm处出现了最大激发峰，则表明了用300nm的光照射待测物后，到达相对应的激发态振动能级上的电子最多。 2、发射光谱：它的波形只跟基态振动能级的分布有关。同样道理，每个发射峰对应于一个基态的振动能级，横坐标表示不同荧光的波长，纵坐标反映了发射出对应波长荧光的电子数的多少。 另外，确定某种物质的激发和发射波长基本要经历以下步骤，如下描述也是我自己的理解，请大家看下是否正确： 首先扫紫外，确定激发波长，在该激发波长下扫发射光谱：由于最大激发波长下跃迁至相应激发态振动能级的电子数最多，所以选择这个波长是为了是让大部分电子处于激发态，从而提高荧光的产生效率； 现在的问题是，得到最大发射波长后再扫激发光谱是什么意思呢？电子都已经回基态了，又激发它们一遍吗？发射峰反映的是基态的情况，而激发峰反映的是激发态的情况，此时用最大发射波长来扫激发的目的是什么？ 还有一个问题是：三维荧光技术是不是可以省略掉以上的步骤呢？设定好激发和发射波长及扫描范围（数值参考相关文献后设定）就可以直接扫描得到立体图了？ 问题比较多和繁琐，也是自己思考了很久才得出的，为此都没睡好觉（请看我的发帖时间。。），希望能换回大家一个合理的解答，在此跪谢大家！ |
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6楼2013-11-07 19:16:22
【答案】应助回帖
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小木棉要努力(release53代发): 金币+5, O(∩_∩)O谢谢 2013-10-28 10:57:19
小木棉要努力: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢你的回答，很有助于我的理解 2013-10-30 11:05:33
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二维光谱： 1、首先测紫外吸收光谱。得到的峰是该物质的最大吸收； 2、测发射光谱。上述得到的最大吸收作为激发波长，会得到一个最大发射峰（可暂时理解为最佳发射）； 3、测激发光谱。上述得到的最大发射峰作为固定波长，扫描激发光谱，得到一个激发峰（可暂时理解为最佳激发波长）。之所以说是暂时，是因为若要得到较准确的激发、发射峰，需要上述2、3步反复测，直到所得的激发峰、发生峰的位置不变。 就是说，用最大发射波长扫描激发目的就是确定该物质的最佳激发波长。 三维光谱扫描像你说的那样。当然吸收是没有的了。 |
2楼2013-10-25 16:40:41
3楼2013-10-27 19:11:32
4楼2013-10-30 11:05:52
