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sexy758

新虫 (初入文坛)

[求助] BL21大肠杆菌大规模生产初期自溶 已有5人参与

小弟目前在大肠杆菌发规模发酵上遇到了很大的问题:

我们目前采取的是三级发酵,发现三级发酵罐移种后头1~2小时菌种生长正常,但OD600到了2左右就开始溶氧上升,OD下降到灭菌后水平,PH上升,通过镜检发现菌种已经自溶,大约再过8-10小时又能长上来,蛋白也能够正常表达。有时候又能够长得很好,不出现这个问题。

最初在是在三级发酵罐出现这种现象,但最近在一二级种子罐内也开始发生菌体自溶现象,出现问题的发酵液都做过噬菌体平板,没有发现噬菌斑存在。

菌种在LB培养基中生长正常,移入发酵培养基中后就会随机发生自溶现在,我怀疑可能是C/N比不平衡造成,也向大家请教下有没有别的解决思路,小弟在此感谢不尽。
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小冀-

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【答案】应助回帖

这不是感染噬菌体,BL21菌株本来就有这种问题
···
8楼2017-02-17 15:04:53
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小冀-

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引用回帖:
11楼: Originally posted by 阳光真强烈 at 2017-09-05 12:25:39
请问自溶频率高吗,除了更换菌种,还有其他解决办法?...

主要看发酵体积,药瓶的话一直没有问题,5L罐子就会是不是的出现一次,到50-100L的时候问题就很严重了,我们最后由于要放大,为了避免原料浪费,就换菌株了
···
12楼2017-09-05 12:28:16
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小冀-

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引用回帖:
13楼: Originally posted by 阳光真强烈 at 2017-09-05 12:30:31
对的,现在也是面临同样的问题。不过筛到一株变异菌,目前大罐也没有溶菌现象。不过酶活不高。想彻底解决这个问题。
...

不太好弄,这是普遍现象,不过有兴趣的话你可以研究一下,祝好运
···
14楼2017-09-05 12:44:39
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小冀-

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内容已删除
···
17楼2018-03-20 17:47:31
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