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sexy758

新虫 (初入文坛)

[求助] BL21大肠杆菌大规模生产初期自溶 已有5人参与

小弟目前在大肠杆菌发规模发酵上遇到了很大的问题:

我们目前采取的是三级发酵,发现三级发酵罐移种后头1~2小时菌种生长正常,但OD600到了2左右就开始溶氧上升,OD下降到灭菌后水平,PH上升,通过镜检发现菌种已经自溶,大约再过8-10小时又能长上来,蛋白也能够正常表达。有时候又能够长得很好,不出现这个问题。

最初在是在三级发酵罐出现这种现象,但最近在一二级种子罐内也开始发生菌体自溶现象,出现问题的发酵液都做过噬菌体平板,没有发现噬菌斑存在。

菌种在LB培养基中生长正常,移入发酵培养基中后就会随机发生自溶现在,我怀疑可能是C/N比不平衡造成,也向大家请教下有没有别的解决思路,小弟在此感谢不尽。
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阳光真强烈

木虫 (职业作家)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 小冀- at 2017-09-05 12:28:16
主要看发酵体积,药瓶的话一直没有问题,5L罐子就会是不是的出现一次,到50-100L的时候问题就很严重了,我们最后由于要放大,为了避免原料浪费,就换菌株了...

对的,现在也是面临同样的问题。不过筛到一株变异菌,目前大罐也没有溶菌现象。不过酶活不高。想彻底解决这个问题。

发自小木虫IOS客户端
13楼2017-09-05 12:30:31
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njuwy

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

2楼2013-10-04 17:00:42
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sexy758

新虫 (初入文坛)

噬菌体平板是按照微生物实验教材上配置的,下层2%LB琼脂,上层是发酵罐中发酵液用大肠杆菌培养过夜的LB发酵液梯度稀释后,按1%的接种量接到1%LB琼脂中,37度培养。
3楼2013-10-04 17:13:28
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yehuasong

铁虫 (小有名气)

请问楼主的问题有没有解决,我们最近也出现类似的现象
4楼2015-02-06 14:39:57
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