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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » BL21大肠杆菌大规模生产初期自溶
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sexy758

新虫 (初入文坛)

[求助] BL21大肠杆菌大规模生产初期自溶 已有5人参与

小弟目前在大肠杆菌发规模发酵上遇到了很大的问题：

我们目前采取的是三级发酵，发现三级发酵罐移种后头1～2小时菌种生长正常，但OD600到了2左右就开始溶氧上升，OD下降到灭菌后水平，PH上升，通过镜检发现菌种已经自溶，大约再过8-10小时又能长上来，蛋白也能够正常表达。有时候又能够长得很好，不出现这个问题。

最初在是在三级发酵罐出现这种现象，但最近在一二级种子罐内也开始发生菌体自溶现象，出现问题的发酵液都做过噬菌体平板，没有发现噬菌斑存在。

菌种在LB培养基中生长正常，移入发酵培养基中后就会随机发生自溶现在，我怀疑可能是C/N比不平衡造成，也向大家请教下有没有别的解决思路，小弟在此感谢不尽。
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1楼 2013-10-03 17:36:57
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yehuasong

铁虫 (小有名气)
请问楼主的问题有没有解决，我们最近也出现类似的现象
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4楼2015-02-06 14:39:57
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

这不是感染噬菌体，BL21菌株本来就有这种问题
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···
8楼2017-02-17 15:04:53
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
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···
17楼2018-03-20 17:47:31
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普通回帖

njuwy

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
2楼2013-10-04 17:00:42
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sexy758

新虫 (初入文坛)
噬菌体平板是按照微生物实验教材上配置的，下层2%LB琼脂，上层是发酵罐中发酵液用大肠杆菌培养过夜的LB发酵液梯度稀释后，按1%的接种量接到1%LB琼脂中，37度培养。
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3楼2013-10-04 17:13:28
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fxchen1990

银虫 (初入文坛)
希望楼主能分享一下解决问题的方法，私聊也行。谢谢，急求

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2015-12-02 11:57:00
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小花木兰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们最近2级发酵，发现发酵罐移种后，但OD600到了2～6左右就开始溶氧上升，OD下降，PH上升，并且起少量泡沫，通过镜检发现并没有染菌，大约再过8-15小时又能长上来，蛋白也能表达。有时候不出现这个问题。
有时诱导后不久就起大量泡沫，OD从30左右降到5左右     一直找不到原因
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6楼2015-12-22 10:38:40
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likelang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小花木兰 at 2015-12-22 10:38:40
我们最近2级发酵，发现发酵罐移种后，但OD600到了2～6左右就开始溶氧上升，OD下降，PH上升，并且起少量泡沫，通过镜检发现并没有染菌，大约再过8-15小时又能长上来，蛋白也能表达。有时候不出现这个问题。
有时诱导 ...

建议重新构建菌株
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7楼2017-02-17 14:46:32
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cxzcyk

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

内容已删除
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招你惹你
9楼2017-05-03 16:10:50
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caoqingqing

新虫 (初入文坛)
请问问题解决了吗?怎么解决的，求解，谢谢！
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10楼2017-06-07 11:26:37
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