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求助： 氨基酸OPA 柱前衍生
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各位大神好： 我最近在用agilent AAA 柱子 （专用于氨基酸的检测和分离）试图做method validation, 但是发现数据误差较大 RSD =10% （即用同一个样品进样三次），百思不得其解所以跪求大神提点， 下边是我的实验条件和所用仪器 HPLC: Agilent 1100, autosampler 1313A MOBILE PHASE A: 40mM Na2HPO4, PH= 7.8 MOBLIE PHASE B: MeOH: ACN:H2O (45:45：10） OPA reagent (sigma aldrich) : 邻苯二甲醛 Borate buffer: 0.2 M, pH = 10.2 HPLC condition: 61%A :39% B isocrastic for 7 min Temp: 40 C Flow rate: 1.0ml/min uv: 338 bw 10 262 bw 16 The autosampler program: Draw 10.0 ul from borate buffer Draw 5.0 ul amino acid, 200ul/min speed Mix 15ul in air, 200ul/min speed, 5 times Wait for 0.5 min Draw 0.0 ul from ACN:H20 (50:50), 200ul/min speed, Draw 10.0 ul OPA, 200ul/min speed Mix 25ul in air, 200ul/min speed, 6 times Inject Wait for 0.1 min Needle wash in ACN:H2O(50:50) Valve pass 氨基酸和OPA的浓度比大约是1:10， 理论上我应该加了过量的OPA 所以我现在的问题是想知道问题到底出在哪里， 是我的program 有问题吗， 还是我的氨基酸和OPA的用量比例不对， 抑或是OPA 试剂有问题 跪谢！！ |
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2楼2013-10-02 09:29:01
chenyuanli
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