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冰凝东金虫 (小有名气)
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[求助]
拟南芥突变体纯合子目的基因仍有表达！真心求助！ 已有1人参与
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| 购买的拟南芥T-DNA插入突变体（SALK and CS），T-DNA插入在启动子或者内含子区域都有，提取DNA经PCR鉴定出纯合子，但是以纯合子cDNA为模板进行PCR，仍然可以获得目的基因片段（已测序确定），引物是夸内含子区，且RNA做了DNA酶消化！几个突变体都是这样，不知道大家有么有类似经历，都快郁闷死了，老板天天骂，说是我的问题！真心请教高手解决问题……现行谢过…… |
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wangpeng227
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bullfrog325
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【答案】应助回帖
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冰凝东: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-09-29 14:43:27
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冰凝东: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-09-29 14:43:27
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突变体可以上TAIR查看, 在sequence viewer里面选你要看的基因区域就可以看到突变体的插入位置. 因为SALK/SAIL一直在更新的, 或许现在有在EXON插入的T-DNA. T-DNA 大小一般10k 左右(把筛选标记的大小也算进去). 所以当T-DNA出现在基因里面时,转录的时候是完全可能把整个T-DNA一起转录出来再接着转录基因剩下的部分的(虽然TDNA里面自带转录终止片段的). 启动子一般认为是在转录起点前面2到3k的范围里面, 但是这只是一个很模糊的定义. 因为负责基因表达的启动子可以出现在基因里面(比如说AGAMOUS, 它的启动子在intron里面), 甚至3'的地方. |
4楼2013-09-26 19:11:04
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