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有关于DAPI染色的问题
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本人最近在做海水中细菌计数的实验，用到的染料为DAPI（买来是10mg一小瓶粉末的那种），在操作中碰到几个问题，想让有经验的大虾帮我看看操作是否正确~ 我的操作过程是：用10mL的无菌水将10mg的DAPI粉末稀释成1mg/mL的工作液，置于-20℃下冻存，实验时提前取出使其解冻，染色时抽滤水体到差不多剩3mL的时候加入20μL染液，黑暗下染5~10min后全部抽干净水，再拿膜去观察计数。问题有： 1、加入20μL DAPI染液，这个量合适吗？ 2、每次实验前都要拿DAPI出来解冻，也就是存在一个反复冻融的过程，这样会不会不太好呢？ 3、一般在膜与载玻片之间要滴一滴镜油，那么在膜与盖玻片之间还需滴一滴镜油吗？ 我有滴过，但在观察计数的时候常发现细菌会随着油流动而不好计数，是否这滴油可以不加了？ 问题比较多，描述比较唠叨，谢谢大家的帮助！ |
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