| 查看: 1825 | 回复: 4 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
实验准备中金虫 (小有名气)
|
[求助]
求助：极性大的大分子物质的分离
|
|||
| 分离出来了一个大分子物质，极性很大，点了硅胶板，点停留在原点基本不动，凝胶柱也试过了，分子量太大基本不停留，结果杂质依然很多。我该用什么办法分离呢？求助 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有242人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 无机物的极性非极性？
已经有10人回复
- 极性太大的东西分离问题
已经有11人回复
- 常见的两亲性的化合物都有哪些？
已经有5人回复
- 水溶性大，极性也相近的物质如何分离？
已经有20人回复
- 请问：用二氯甲烷跑板，是极性大的物质点跑在上边还是极性小的在上边？
已经有14人回复
- 求水溶性的极性大的橡胶
已经有10人回复
- C18反相柱 如何分离两种极性很近的物质
已经有9人回复
- 蛋白分离纯化的纯品 带盐放-20度会变性吗？
已经有22人回复
- 大极性物质的分离
已经有4人回复
- 【求助】亲水C18 填料相关资料 及分离极性大化合物应注意什么？
已经有5人回复
- 【求助】求助大极性物质的分离
已经有12人回复
- 【求助】难以通过湿法上样的极性大的混合物的分离
已经有4人回复
- 【求助】极性比较大物质的分离
已经有18人回复
- 【求助】极性非常小的物质的分离
已经有27人回复
- 【求助】HPLC分离小极性物质，用正相柱还是反相柱？
已经有19人回复
- 【求助】薄层板如何分离极性相似的两种物质
已经有12人回复
- 【求助】用制备液相（反相）分离小极性化合物
已经有12人回复
- 【求助】水部位东西极性太大怎么砍断
已经有42人回复
- 【求助】分离低极性的化合物
已经有3人回复
- 【交流】极性大的物质怎么检测啊
已经有6人回复
- 【求助】大极性物质如何分离
已经有28人回复
- 【求助】C18反相薄层怎么用啊！急求
已经有15人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2013-09-24 11:53:26
silicare: MolEPI+1 2014-05-23 08:03:43
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2013-09-24 11:53:26
silicare: MolEPI+1 2014-05-23 08:03:43
|
既然生物大分子的极性大，那么可以考虑用强离子交换交换层析柱试试看。 可在摸索方法的过程中用较宽的pH值范围。对于一个已知等电点的蛋白质，可根据其等电点来选择离子交换柱上的离子交换剂（离子交换剂基团不是洗脱缓冲液，是交换柱柱上的带电荷的基团，比如:羧甲基、季氨基、二乙基氨乙基等）。如果选用的离子交换柱上的离子交换剂是阴离子交换剂，使用缓冲溶液的pH值应高于该蛋白质的等电点，因为此时的蛋白质在缓冲溶液中携带净负电荷，可与离子交换柱上的阴离子交换剂结合。如果选择如果选用的离子交换柱上的离子交换剂是阳离子交换剂，使用缓冲溶液的pH值应高于该蛋白质的等电点，因为此时的蛋白质在缓冲溶液中携带净正电荷，可与离子交换柱上的阳离子交换剂结合。 对于未知的等电点的蛋白质，可以用DNAstar中的Protein,打开和新建一个序列文件。选择Analysis ---->Tritration Curve,会出来滴定曲线，横坐标为电荷数，纵坐标为pH值，在滴定曲线上找到电荷数为零的pH值即为等电点。也可以到蛋白质数据库中搜索出该蛋白质的的等电点。 未知的等电点的蛋白质，如果不是先用用软件预测其等电点，也不到到蛋白质数据库中搜索出该蛋白质的的等电点，或者说就是个未知蛋白质，而且也不愿意做等电聚焦。在这种情况下，对于未知的等电点的蛋白质，也可以直接上离子交换柱，但是操作有一定困难。此时选择离子交换柱上的离子交换剂（离子交换剂基团不是洗脱缓冲液，是交换柱柱上的带电荷的基团，比如:羧甲基、季氨基、二乙基氨乙基等）比较费事。在实际操作中常选择这样的方法：先选择一个阴离子交换剂（离子交换剂基团不是洗脱缓冲液，是交换柱柱上的带电荷的基团，比如:羧甲基、季氨基、二乙基氨乙基等），再寻则一个中性的pH缓冲溶液（pH大约为7)，将蛋白质pH为7的环境下透析去掉小分子杂质，然后过阴离子交换柱，根据过柱后的结果确定下一个使用的缓冲溶液的pH值。如果目的蛋白质在穿过液中，也就是没有结合到交换柱上直接流出了，那木说明目的蛋白质在该pH下带有正电荷，可将缓冲溶液的pH升高1，然后在将蛋白质pH为8的环境下透析去掉小分子杂质，然后再过阴离子交换柱，根据过柱后的结果确定下一个使用的缓冲溶液的pH值。以此类推，直到目的蛋白质能够结合到阴离子交换柱为止。也可以使用阳离子交换柱做类似的选择。 |
2楼2013-09-24 11:27:28
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
3楼2013-09-24 11:32:04
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
4楼2013-09-24 12:06:32
zhenwuhuang
至尊木虫 (文学泰斗)
- 应助: 4351 (副教授)
- 金币: 9353.8
- 散金: 1
- 红花: 137
- 帖子: 65983
- 在线: 2452.1小时
- 虫号: 2227382
- 注册: 2013-01-07
- 性别: GG
- 专业: 人类营养
5楼2013-09-24 12:53:30
