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mandywang

铁虫 (正式写手)

[求助] DGGE 土壤真菌 条件摸索ing help

样品 土壤微生物的DNA
PCR 用的引物是ITS1-F-GC 和ITS4
DGGE 条件 30v-20min,65v-960min,
图1梯度为30-70%,觉得太集中,
所以换了图2,10-45%,结果一片
又换了图3,30-45%,结果也不理想。
请教大侠们,我这个是梯度的问题吗,10-45与30-45与30-70 之间不是应该有重合的区域吗,为什么都不一样呢。
如果不是梯度问题 是什么原因的
求解脱……
DGGE 土壤真菌 条件摸索ing help
30-70.JPG


DGGE 土壤真菌 条件摸索ing help-1
10-30.JPG


DGGE 土壤真菌 条件摸索ing help-2
30-45.JPG
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inging
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mandywang: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-09-21 11:06:12
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2013-09-21 12:59:28
再试试30-55,罐胶要均匀

[ 发自小木虫客户端 ]
成功者永不放弃,放弃者永不成功。
2楼2013-09-21 10:56:28
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mandywang

铁虫 (正式写手)

送红花一朵
灌胶有什么窍门吗
inging
3楼2013-09-21 11:05:09
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fzhrobin

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mandywang: 金币+5, ★有帮助 2013-09-24 09:25:15
灌胶之前一定要浑匀,灌胶的时候最好用小针头,摇的时候速度要缓慢均匀。印象中真菌需要的胶浓度要小一点,而且要保证pcr产物足够亮

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-09-22 11:08:39
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morsss

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主,能提供一下你配胶的配方吗?我也是菜鸟,也是土壤提取,结果什么都没有。
5楼2013-09-23 09:21:59
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mandywang

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by morsss at 2013-09-23 09:21:59
楼主,能提供一下你配胶的配方吗?我也是菜鸟,也是土壤提取,结果什么都没有。

胶的配方在买DGGE 仪器的时候 说明书里都有的,现在没在手边,我大概说一下。
先配的40%胶贮液,然后用40%胶贮液和50倍TAE配你需要的胶(6%,8%,10%),然后加尿素和去离子甲酰胺(不同梯度不一样)
inging
6楼2013-09-24 09:24:42
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