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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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mandywang

铁虫 (正式写手)

[求助] DGGE 土壤真菌 条件摸索ing help

样品 土壤微生物的DNA
PCR 用的引物是ITS1-F-GC 和ITS4
DGGE 条件 30v-20min，65v-960min，
图1梯度为30-70%，觉得太集中，
所以换了图2，10-45%，结果一片
又换了图3，30-45%，结果也不理想。
请教大侠们，我这个是梯度的问题吗，10-45与30-45与30-70 之间不是应该有重合的区域吗，为什么都不一样呢。
如果不是梯度问题 是什么原因的
求解脱……
DGGE 土壤真菌 条件摸索ing help
30-70.JPG


DGGE 土壤真菌 条件摸索ing help-1
10-30.JPG


DGGE 土壤真菌 条件摸索ing help-2
30-45.JPG
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mandywang

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inging
1楼 2013-09-21 10:39:17
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mandywang: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-09-21 11:06:12
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-09-21 12:59:28
再试试30-55，罐胶要均匀

[ 发自小木虫客户端 ]
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成功者永不放弃，放弃者永不成功。
2楼2013-09-21 10:56:28
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mandywang

铁虫 (正式写手)
送红花一朵
灌胶有什么窍门吗
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inging
3楼2013-09-21 11:05:09
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fzhrobin

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mandywang: 金币+5, ★有帮助 2013-09-24 09:25:15
灌胶之前一定要浑匀，灌胶的时候最好用小针头，摇的时候速度要缓慢均匀。印象中真菌需要的胶浓度要小一点，而且要保证pcr产物足够亮

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-09-22 11:08:39
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morsss

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主，能提供一下你配胶的配方吗？我也是菜鸟，也是土壤提取，结果什么都没有。
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5楼2013-09-23 09:21:59
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mandywang

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by morsss at 2013-09-23 09:21:59
楼主，能提供一下你配胶的配方吗？我也是菜鸟，也是土壤提取，结果什么都没有。

胶的配方在买DGGE 仪器的时候 说明书里都有的，现在没在手边，我大概说一下。
先配的40%胶贮液，然后用40%胶贮液和50倍TAE配你需要的胶（6%，8%，10%），然后加尿素和去离子甲酰胺（不同梯度不一样）
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inging
6楼2013-09-24 09:24:42
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