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小沐虫金虫 (初入文坛)
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土壤磷酸酶活性测定遇到问题急需求解？？
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最近在测酸性磷酸酶，先做表曲，发现没有梯度变化，都显示一个颜色，不知道为什么？？ 我的方法是取0、1、2、3、4、5、6和7mL酚的工作液置于50mL容量瓶中，分别加入20mLddH20,再加入0.25mL缓冲液pH5.O的醋酸盐缓冲0.5mL2%的4-氨基安替啦琳溶液，0.5rnL8%的铁氰化钾溶液。每次加入试剂都要充分摇动，最后定容至50mL，15min后，并在分光光度计波长为570nm比色。绘制标准曲线。 求解？？？？？？？？？？？？？？？ 测土样里磷酸酶发现颜色是深蓝色，最终不是粉红色吗？并且各处理测的值也相近。很郁闷，找不出原因？？？求高手指点！！！！！！！！ 我的方法如下： 称取5g过20目蹄的风干土样，置于50rnL三角瓶中，加2.5mL甲苯，轻摇15min 后，加l0mL憐酸苯二钠溶液和l0mL相应的缓冲液（酸性憐酸酶：pH5.0的醋酸盐 缓冲液），充分振荡摇勻后置于37T：恒温箱培养24h。过滤，取3mL滤液加入50mL容量瓶中，加 20mLddH20，加0.25mL缓冲液（酸性憐酸酶：pH5.0的醋酸盐缓冲液），0.5mL2%的4-氨基安替批琳溶液，0.5mL8%的铁氰化钾溶液15min后，在分光光度计波长为570nm比色测定溶液的吸光度值. 急求解答······························· 非常感谢！ |
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小沐虫
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