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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 分析多肽，多次进样后拖尾？怎么办？
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baby88

金虫 (初入文坛)

[求助] 分析多肽，多次进样后拖尾？怎么办？

在纯化多肽过程中，分析纯化的馏分，进多次样品后，发现有拖尾现象，而且越来越严重，而首次进样时是没有这个问题的。
分析柱:Kromasil 100A,5C18,250*4.6mm,
流动相:水，ACN,(都加0.1%TFA )。
试了80%ACN冲洗柱子，没能解决。
各位，有啥建议没？

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1楼 2013-09-03 11:16:06
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

dela

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
baby88: 金币+4, ★有帮助, 谢谢，我找空试下 2013-09-04 19:38:09
觉着是不是应该换个缓冲液看看，分析一下多肽的等电点，找一个适当PH的水相
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5楼2013-09-04 10:01:35
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e_liang369

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
baby88: 金币+2, ★有帮助 2013-10-24 18:35:07
是否样品溶液有问题，照理说你这个流动相是有利于色谱柱封尾的。
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悲催的研发！
2楼2013-09-03 16:29:57
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baby88

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by e_liang369 at 2013-09-03 16:29:57
是否样品溶液有问题，照理说你这个流动相是有利于色谱柱封尾的。

溶液是和流动相相同的，那只能是样品问题了？还是可能这个分析方法不适用这个样品，那这个拖尾的原因是色谱柱的问题?  可开始的时候没有啊？
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3楼2013-09-04 06:36:35
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wy1518

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
baby88: 金币+4, ★有帮助, 谢谢。洗脱不完全，如何能证明呢？不进样的同样条件跑了下，没有再出峰的。 2013-09-04 19:39:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by baby88 at 2013-09-04 06:36:35
溶液是和流动相相同的，那只能是样品问题了？还是可能这个分析方法不适用这个样品，那这个拖尾的原因是色谱柱的问题?  可开始的时候没有啊？...

是洗脱不完全 加大水的比例试试 或者换其他流动相 比如磷酸盐缓冲液

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-09-04 07:38:21
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jgy2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换根耐酸柱，0.1%TFA的pH值相当低，普通柱根本就耐受不了几天
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6楼2013-09-04 10:22:19
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baby88

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jgy2000 at 2013-09-04 10:22:19
换根耐酸柱，0.1%TFA的pH值相当低，普通柱根本就耐受不了几天

一般多肽的分析是这样的，流动相加0.1%TFA。可能我这个样品比较特别了，但柱子应该是没问题的。
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7楼2013-09-04 19:37:35
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leolee7882

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
suruiqin: 编辑内容 2013-09-06 05:58
suruiqin: 分析版禁止留任何个人联系方式，已给您编辑，下次注意~ 2013-09-06 05:59:32
这里这么多做多肽的朋友，可以站内联系，以共交流吗》，欢迎来讨论！

[ Last edited by suruiqin on 2013-9-6 at 05:58 ]
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8楼2013-09-05 16:21:24
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baby88

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by leolee7882 at 2013-09-05 16:21:24
这里这么多做多肽的朋友，能留下联系方式，以共交流吗》我的邮件lishengying23@163.com，欢迎来讨论！

小伙伴，你想交流啥啊，发帖、发消息都可以啊
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9楼2013-09-05 20:35:24
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mingge

银虫 (正式写手)
蛋白一般是很容易吸附在硅胶表面的，可以先用高盐流动相冲洗一下，最好咨询一下厂家的冲洗方法。
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Q1454596160
10楼2013-10-09 11:37:58
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