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baby88

金虫 (初入文坛)

[求助] 分析多肽,多次进样后拖尾?怎么办?

在纯化多肽过程中,分析纯化的馏分,进多次样品后,发现有拖尾现象,而且越来越严重,而首次进样时是没有这个问题的。
分析柱:Kromasil 100A,5C18,250*4.6mm,
流动相:水,ACN,(都加0.1%TFA )。
试了80%ACN冲洗柱子,没能解决。
各位,有啥建议没?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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dela

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
baby88: 金币+4, 有帮助, 谢谢,我找空试下 2013-09-04 19:38:09
觉着是不是应该换个缓冲液看看,分析一下多肽的等电点,找一个适当PH的水相
5楼2013-09-04 10:01:35
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普通回帖

e_liang369

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
baby88: 金币+2, 有帮助 2013-10-24 18:35:07
是否样品溶液有问题,照理说你这个流动相是有利于色谱柱封尾的。
悲催的研发!
2楼2013-09-03 16:29:57
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baby88

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by e_liang369 at 2013-09-03 16:29:57
是否样品溶液有问题,照理说你这个流动相是有利于色谱柱封尾的。

溶液是和流动相相同的,那只能是样品问题了?还是可能这个分析方法不适用这个样品,那这个拖尾的原因是色谱柱的问题?  可开始的时候没有啊?
3楼2013-09-04 06:36:35
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wy1518

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
baby88: 金币+4, 有帮助, 谢谢。洗脱不完全,如何能证明呢?不进样的同样条件跑了下,没有再出峰的。 2013-09-04 19:39:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by baby88 at 2013-09-04 06:36:35
溶液是和流动相相同的,那只能是样品问题了?还是可能这个分析方法不适用这个样品,那这个拖尾的原因是色谱柱的问题?  可开始的时候没有啊?...

是洗脱不完全 加大水的比例试试 或者换其他流动相 比如磷酸盐缓冲液

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-09-04 07:38:21
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jgy2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换根耐酸柱,0.1%TFA的pH值相当低,普通柱根本就耐受不了几天
6楼2013-09-04 10:22:19
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baby88

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by jgy2000 at 2013-09-04 10:22:19
换根耐酸柱,0.1%TFA的pH值相当低,普通柱根本就耐受不了几天

一般多肽的分析是这样的,流动相加0.1%TFA。可能我这个样品比较特别了,但柱子应该是没问题的。
7楼2013-09-04 19:37:35
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leolee7882

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
suruiqin: 编辑内容 2013-09-06 05:58
suruiqin: 分析版禁止留任何个人联系方式,已给您编辑,下次注意~ 2013-09-06 05:59:32
这里这么多做多肽的朋友,可以站内联系,以共交流吗》,欢迎来讨论!

[ Last edited by suruiqin on 2013-9-6 at 05:58 ]
8楼2013-09-05 16:21:24
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baby88

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by leolee7882 at 2013-09-05 16:21:24
这里这么多做多肽的朋友,能留下联系方式,以共交流吗》我的邮件lishengying23@163.com,欢迎来讨论!

小伙伴,你想交流啥啊,发帖、发消息都可以啊
9楼2013-09-05 20:35:24
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mingge

银虫 (正式写手)

蛋白一般是很容易吸附在硅胶表面的,可以先用高盐流动相冲洗一下,最好咨询一下厂家的冲洗方法。
Q1454596160
10楼2013-10-09 11:37:58
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