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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 安捷伦超高效液相色谱柱新买两天，压力升高，停泵后压力缓慢下降，柱子塌陷了？
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xiaoqiu2010

金虫 (小有名气)

[求助] 安捷伦超高效液相色谱柱新买两天，压力升高，停泵后压力缓慢下降，柱子塌陷了？已有1人参与

我用的agilent1290超高效液相色谱，色谱柱为zorbax SB-C18,2.1*100mm,1.8um。
刚毕业工作，就遇到这等郁闷的事，求各位老师帮忙了，此事经过如下：
1、液相之前放在一实验室（2~3个月），空调坏了，夏天温度估计有40度，我来后搬到另一个有空调的实验室了，仪器里面应该长菌了。
2、用前将流动相白色滤头用10%HNO3浸泡30min，超声10min后冲洗至中性；仪器个通路都purge；接上色谱柱（旧柱），压力稳定，试运行，走了几针样品（开始没太注意压力的变化，但是是在正常范围内）
3、次日改换哇哈哈纯净水做水相（之前是蒸馏水，水和有机相都用0.22um滤膜过滤），开始仪器没问题，走了两针后，压力开始升高。逐步排查，发现在线过滤器和柱子都有堵塞，换了一个滤垫（在线过滤器里面的金属薄片），缓慢冲洗柱子，无效，怀疑有固体颗粒，反冲，亦无效，用异丙醇：乙腈=25:75的流动相低流速冲洗，仍然无效。
4、无奈去隔壁实验室去冲柱子，乙腈：水=20:80冲洗，压力很快降低，恢复。
5、开始试验，并将水换成了屈臣氏的纯净水，在平衡过程发现柱压总是缓慢上升，没有停下来的趋势，其他老师影响不大就开始试验，序列走了8针血浆样品（乙酸乙酯萃取，甲醇复溶，15000rpm*10min离心），压力又猛增，不敢走样品了，同时发现在线过滤器又堵了，超声后，开始冲洗柱子，柱压还是降不下来，又到隔壁实验室去冲，压力不降。
5、狠狠心和小领导商量买了根新柱，活化后，平衡柱子，压力仍然缓慢上升（2bar/10min左右），没有停下来的趋势，和老师商量后觉得不能总是纠结这个问题，只要不影响样品分析就可以走，于是当天晚上序列走样（标准品），次日发现压力从260bar升到了580bar（60%乙腈），我都快疯了。
6、冲洗柱子，无效，压力略有升高，并且停泵后，压力缓慢下降，水含量越高下降速度越慢，如20%乙腈，0.2ml/min，停泵后，需要经过15min的时间压力才能降到0bar。
我的柱子是不是又坏了呀，如果大领导知道后肯定会骂我的，新柱子两天就报废，我的命怎么这么苦呀。
流动相每天都更换，应该是仪器的问题吧，但是到底是哪里出了问题能，望各位高手给予指点，期盼看到生活的曙光，谢谢啦！
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边走边学，边学边用，边用边问
1楼2013-08-31 16:00:47
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

weantony

铜虫 (正式写手)

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12楼: Originally posted by xiaoqiu2010 at 2013-09-02 14:35:53
样品是经过高速离心的，15000r/min*10min。你们都用什么样的柱子呢？3.0um？如果不用亚微米柱子是不是就体现不出1290的优势呢，因为我们没有接质谱。非常感谢...

我们生物分析一般都是150*2.1 5um的柱子,我们实验室装1290的时候工程师是说不建议用1290作生物样本分析的,说最好每个样本都要过滤,1290接质谱也没问题得
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16楼2013-09-03 15:19:35
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zhangkunnb

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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karl2100: 金币+1, 3Q 2013-09-03 01:13:44
楼主确实有点悲催了。。。不知道楼主有没有用保护住的？这个情况我也觉得不会是柱子的问题，有可能是管路堵塞了，因为你说过仪器可能长菌，可能没有冲干净，建议系统清理管路。另外可借用隔壁实验室液相检查一下新柱子是不是堵了，即使堵了也不必担心，打电话给色谱柱的工程师，请教一下如何系统的清洗。
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奋斗！
3楼2013-09-01 21:13:34
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沙伯略

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9楼: Originally posted by xiaoqiu2010 at 2013-09-02 14:24:39
现在都不敢开仪器了，之前不接柱子用纯乙腈冲了两天，但没有效果，您所说的强洗脱溶剂除了甲醇和乙腈之外还有别的吗？谢谢...

异丙醇啊、四氢呋喃~配置一定比例的它的甲醇或乙腈溶液就行了~
安捷伦超高效液相色谱柱新买两天，压力升高，停泵后压力缓慢下降，柱子塌陷了？
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向前出发，永远向前！
15楼2013-09-02 22:33:01
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沙伯略

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【答案】应助回帖

★
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karl2100: 金币+1, 谢谢回复！ 2013-09-03 01:13:35
楼主你说的我都头疼！流动相基本上都是色谱级别的纯度，你有用微孔滤膜抽滤了，基本不会出问题。液相仪器其实和容易出问题的：我们实验室液相一般停用时间不会超过一周，基本上都让其管道保持有新鲜流动相。你的情况在液相仪器管道彻底清洁之前就别进样了。可以先不接柱子而接上二通，用各种强洗脱溶剂清洁管路，直至基线稳定到自己放心为止。God bless you ~!!!
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向前出发，永远向前！
2楼2013-08-31 21:42:42
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linglingF8

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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karl2100: 金币+1, 谢谢发言！ 2013-09-03 01:13:59
看了这种情况感觉非常的担忧，这个时候应该咨询工程师了，agilent的1290我们单位经常停着不用，只要把管路中冲上有机相就不会有这种问题。为什么我们不用？因为水要求非常高，要用注射用水（超纯水），俺们还没买，屈臣氏的注射用水比较贵。还有请工程师来排查一下是哪里堵了。如果仪器不正常千万别过夜。
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作有责任的制药人
4楼2013-09-02 09:19:45
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buyu26

金虫 (正式写手)

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中药2000: 金币+1, 谢谢 2013-09-04 17:19:18
这是管路堵了吧！把哪些管路挨个检查一下，不过要小心，那些比较精密，还有就是看看进样针和针座堵了没有！
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途经窄处，留一道，让人行!
5楼2013-09-02 10:26:47
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装水的水杯

捐助贵宾 (著名写手)

能把事情做成的人才是牛人

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★
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中药2000: 金币+1, 谢谢 2013-09-04 17:19:24
你把白色虑头去掉试一下？
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一定时时记得自己在做什么
6楼2013-09-02 11:20:02
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weantony

铜虫 (正式写手)
★
中药2000: 金币+1, 谢谢 2013-09-04 17:19:31
你样品过滤了么 工程师给我们装1290的时候是不建议用亚2微米的柱子进生物样品的 很容易堵
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7楼2013-09-02 11:26:09
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yumulin

金虫 (正式写手)

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karl2100: 金币+1, 谢谢回帖！ 2013-09-03 01:14:15
1、使用大比例水清洗，去柱连双通，高流速清洗1个小时，随时观察柱压（注意不要超过流通池可以耐受的范围）后慢升至高有机相冲洗
2、要考虑是否样品带来的，（样品溶解的溶剂和流动相的兼容性），是否有物质在遇到流动相的低有机相比例时析出
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8楼2013-09-02 13:39:19
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xiaoqiu2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 沙伯略 at 2013-08-31 21:42:42
楼主你说的我都头疼！流动相基本上都是色谱级别的纯度，你有用微孔滤膜抽滤了，基本不会出问题。液相仪器其实和容易出问题的：我们实验室液相一般停用时间不会超过一周，基本上都让其管道保持有新鲜流动相。你的情况 ...

现在都不敢开仪器了，之前不接柱子用纯乙腈冲了两天，但没有效果，您所说的强洗脱溶剂除了甲醇和乙腈之外还有别的吗？谢谢
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边走边学，边学边用，边用边问
9楼2013-09-02 14:24:39
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xiaoqiu2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by linglingF8 at 2013-09-02 09:19:45
看了这种情况感觉非常的担忧，这个时候应该咨询工程师了，agilent的1290我们单位经常停着不用，只要把管路中冲上有机相就不会有这种问题。为什么我们不用？因为水要求非常高，要用注射用水（超纯水），俺们还没买， ...

谢谢，我也不想用1290，领导逼的。再也不敢过夜走样品了。
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边走边学，边学边用，边用边问
10楼2013-09-02 14:28:28
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