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xiaoqiu2010金虫 (小有名气)
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[求助]
安捷伦超高效液相色谱柱新买两天，压力升高，停泵后压力缓慢下降，柱子塌陷了？ 已有1人参与
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我用的agilent1290超高效液相色谱，色谱柱为zorbax SB-C18,2.1*100mm,1.8um。 刚毕业工作，就遇到这等郁闷的事，求各位老师帮忙了，此事经过如下： 1、液相之前放在一实验室（2~3个月），空调坏了，夏天温度估计有40度，我来后搬到另一个有空调的实验室了，仪器里面应该长菌了。 2、用前将流动相白色滤头用10%HNO3浸泡30min，超声10min后冲洗至中性；仪器个通路都purge；接上色谱柱（旧柱），压力稳定，试运行，走了几针样品（开始没太注意压力的变化，但是是在正常范围内） 3、次日改换哇哈哈纯净水做水相（之前是蒸馏水，水和有机相都用0.22um滤膜过滤），开始仪器没问题，走了两针后，压力开始升高。逐步排查，发现在线过滤器和柱子都有堵塞，换了一个滤垫（在线过滤器里面的金属薄片），缓慢冲洗柱子，无效，怀疑有固体颗粒，反冲，亦无效，用异丙醇：乙腈=25:75的流动相低流速冲洗，仍然无效。 4、无奈去隔壁实验室去冲柱子，乙腈：水=20:80冲洗，压力很快降低，恢复。 5、开始试验，并将水换成了屈臣氏的纯净水，在平衡过程发现柱压总是缓慢上升，没有停下来的趋势，其他老师影响不大就开始试验，序列走了8针血浆样品（乙酸乙酯萃取，甲醇复溶，15000rpm*10min离心），压力又猛增，不敢走样品了，同时发现在线过滤器又堵了，超声后，开始冲洗柱子，柱压还是降不下来，又到隔壁实验室去冲，压力不降。 5、狠狠心和小领导商量买了根新柱，活化后，平衡柱子，压力仍然缓慢上升（2bar/10min左右），没有停下来的趋势，和老师商量后觉得不能总是纠结这个问题，只要不影响样品分析就可以走，于是当天晚上序列走样（标准品），次日发现压力从260bar升到了580bar（60%乙腈），我都快疯了。 6、冲洗柱子，无效，压力略有升高，并且停泵后，压力缓慢下降，水含量越高下降速度越慢，如20%乙腈，0.2ml/min，停泵后，需要经过15min的时间压力才能降到0bar。 我的柱子是不是又坏了呀，如果大领导知道后肯定会骂我的，新柱子两天就报废，我的命怎么这么苦呀。 流动相每天都更换，应该是仪器的问题吧，但是到底是哪里出了问题能，望各位高手给予指点，期盼看到生活的曙光，谢谢啦！ |
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