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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 60-100L大肠杆菌发酵，刚开始涉及经验极度匮乏，乞求高手指导
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loganfan

银虫 (正式写手)

[求助] 60-100L大肠杆菌发酵，刚开始涉及经验极度匮乏，乞求高手指导 已有2人参与

培养了几次，但结果都不太理想，主要是细菌密度不够高，搞不清楚是培养基的问题还是控制的问题。
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1楼 2013-08-23 09:21:31
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loganfan

银虫 (正式写手)
我们用的基础培养基是改良的LB培养基，蛋白胨10g/L,酵母浸出粉10g/L，NaCl 5g/L，K2HPO4 5g/L，实罐灭菌后加入消泡剂（1ml/L）,MgCL2（2g/L）和T溶液（2ml/L）。
    种子传代方式为：单颗5ml中管培养过夜,传至60mlLB中8小时，再传至750mlLB中8小时，共6瓶（4500ml）接种至60L基础培养基中。
    培养其实阶段通过控制转速来保证溶氧值保持在25以上，当转速达到400rpm以上，通过通入压缩空气或纯氧气来保证溶氧。
   培养伊始泵入1000ml 20%葡萄糖，随后每一小时补加500ml20%葡萄糖，直至OD600值至10左右（约4h），不再补加葡萄糖，加6mM IPTG诱导，2h。收集菌体。
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7楼2013-08-28 16:08:01
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威妞儿

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
loganfan: 金币+2 2013-08-23 15:32:40
laozuzunzhe: 金币+3, good！ 2013-08-24 08:35:50
自己可以在20-50L发酵罐中小试下，看看结果如何，从小试到中试的阶段是会发生好多变化，如果有时间的话可以自己做单因素多水平的实验，关注下pH、溶氧、搅拌转速、罐压、通气量、培养基碳氮比什么的，都会相应的有变化，只能根据你自己实际情况摸索，我的建议估计你也考虑过，所以做实验吧！
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喜欢生命科学的东东，目前在做ELISA方面的实验
3楼2013-08-23 11:26:03
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loganfan

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 威妞儿 at 2013-08-23 11:26:03
自己可以在20-50L发酵罐中小试下，看看结果如何，从小试到中试的阶段是会发生好多变化，如果有时间的话可以自己做单因素多水平的实验，关注下pH、溶氧、搅拌转速、罐压、通气量、培养基碳氮比什么的，都会相应的有变 ...

您认为碳氮比在什么范围内比较合适呢
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4楼2013-08-23 15:32:29
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威妞儿

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

之前做过的C含量控制在0.35-0.5%，N含量控制在0.07-0.15%，只是我自己的经验之谈，跟你自己的实际会有差异，自己最好摸索下。 
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喜欢生命科学的东东，目前在做ELISA方面的实验
5楼2013-08-23 17:18:52
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