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汕头大学海洋科学接受调剂
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loganfan

银虫 (正式写手)

[求助] 60-100L大肠杆菌发酵,刚开始涉及经验极度匮乏,乞求高手指导 已有2人参与

培养了几次,但结果都不太理想,主要是细菌密度不够高,搞不清楚是培养基的问题还是控制的问题。
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高密度发酵

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loganfan

银虫 (正式写手)

自己先顶一下!
2楼2013-08-23 09:42:42
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威妞儿

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
loganfan: 金币+2 2013-08-23 15:32:40
laozuzunzhe: 金币+3, good! 2013-08-24 08:35:50
自己可以在20-50L发酵罐中小试下,看看结果如何,从小试到中试的阶段是会发生好多变化,如果有时间的话可以自己做单因素多水平的实验,关注下pH、溶氧、搅拌转速、罐压、通气量、培养基碳氮比什么的,都会相应的有变化,只能根据你自己实际情况摸索,我的建议估计你也考虑过,所以做实验吧!
喜欢生命科学的东东,目前在做ELISA方面的实验
3楼2013-08-23 11:26:03
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loganfan

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 威妞儿 at 2013-08-23 11:26:03
自己可以在20-50L发酵罐中小试下,看看结果如何,从小试到中试的阶段是会发生好多变化,如果有时间的话可以自己做单因素多水平的实验,关注下pH、溶氧、搅拌转速、罐压、通气量、培养基碳氮比什么的,都会相应的有变 ...

您认为碳氮比在什么范围内比较合适呢
4楼2013-08-23 15:32:29
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威妞儿

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

之前做过的C含量控制在0.35-0.5%,N含量控制在0.07-0.15%,只是我自己的经验之谈,跟你自己的实际会有差异,自己最好摸索下。 
喜欢生命科学的东东,目前在做ELISA方面的实验
5楼2013-08-23 17:18:52
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wentanbaodao

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
loganfan: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-08-28 16:07:28
密度不够的话,可能是营养不够;产物不高的话就是调控的问题,你可以细细说一下自己的结果对比
6楼2013-08-27 15:48:07
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loganfan

银虫 (正式写手)

我们用的基础培养基是改良的LB培养基,蛋白胨10g/L,酵母浸出粉10g/L,NaCl 5g/L,K2HPO4 5g/L,实罐灭菌后加入消泡剂(1ml/L),MgCL2(2g/L)和T溶液(2ml/L)。
    种子传代方式为:单颗5ml中管培养过夜,传至60mlLB中8小时,再传至750mlLB中8小时,共6瓶(4500ml)接种至60L基础培养基中。
    培养其实阶段通过控制转速来保证溶氧值保持在25以上,当转速达到400rpm以上,通过通入压缩空气或纯氧气来保证溶氧。
   培养伊始泵入1000ml 20%葡萄糖,随后每一小时补加500ml20%葡萄糖,直至OD600值至10左右(约4h),不再补加葡萄糖,加6mM IPTG诱导,2h。收集菌体。
7楼2013-08-28 16:08:01
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loganfan

银虫 (正式写手)

请多多赐教啊
8楼2013-08-28 16:09:44
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wangju87c

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

磷酸盐太少了,自己做实验添加点吧
哥已婚
9楼2014-06-24 12:17:32
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最-难忘

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

菌类不是有个生长曲线吗。超过对数期它就会进入衰亡期,那么久没有多大效果了;还有一种情况就是,培养基消耗结束之后,菌类会产生次生代谢产物,会影响结果的
10楼2014-06-24 23:12:59
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