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loganfan银虫 (正式写手)
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[求助]
60-100L大肠杆菌发酵，刚开始涉及经验极度匮乏，乞求高手指导已有2人参与
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| 培养了几次，但结果都不太理想，主要是细菌密度不够高，搞不清楚是培养基的问题还是控制的问题。 |
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 高密度发酵 |
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loganfan
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2楼2013-08-23 09:42:42
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4楼2013-08-23 15:32:29
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我们用的基础培养基是改良的LB培养基，蛋白胨10g/L,酵母浸出粉10g/L，NaCl 5g/L，K2HPO4 5g/L，实罐灭菌后加入消泡剂（1ml/L）,MgCL2（2g/L）和T溶液（2ml/L）。 种子传代方式为：单颗5ml中管培养过夜,传至60mlLB中8小时，再传至750mlLB中8小时，共6瓶（4500ml）接种至60L基础培养基中。 培养其实阶段通过控制转速来保证溶氧值保持在25以上，当转速达到400rpm以上，通过通入压缩空气或纯氧气来保证溶氧。 培养伊始泵入1000ml 20%葡萄糖，随后每一小时补加500ml20%葡萄糖，直至OD600值至10左右（约4h），不再补加葡萄糖，加6mM IPTG诱导，2h。收集菌体。 |
7楼2013-08-28 16:08:01
loganfan
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8楼2013-08-28 16:09:44