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eiieen

新虫 (小有名气)

[求助] 尿素胶跑DNA(PCR产物),变性不完全

用尿素胶跑PCR产物,发现杂带很多,疑DNA变性不完全。
求:尿素胶的loading buffer配方
求:DNA变性完全的方法
(本实验必须用变性胶跑DNA)
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aaa0001984

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by eiieen at 2013-08-19 12:19:50

配方中没有甘油,加样的时候,样品好沉吗
MQ是什么,O(∩_∩)O谢谢...

MQ是MilliQ water,也就是超纯水了。因为我的样品是RNA,所以都用超纯水防止RNase污染~
9楼2013-08-19 21:27:59
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周圆圆1989

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-08-17 21:09:12
6×Loading buffer:
  30mM EDTA
  36%(v/v) Glycerol
  0.05%(w/v) Xylene Cyanol FF
  0.05%(w/v) Bromophenol Blue
DNA变性不完全会不会是尿素的问题,因为我也没跑过几次变性的PAGE,我也不清楚
2楼2013-08-17 16:47:22
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aaa0001984

至尊木虫 (正式写手)


amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流! 2013-08-17 21:09:19
不知道是尿素葡聚糖胶还是尿素聚丙烯酰胺胶,如果是后者,网上配方挺多,我一般用含有7M尿素的体系,加入loading dye之后95度温育5分钟再点样跑胶。希望对楼主有帮助~
3楼2013-08-17 18:46:58
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eiieen

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aaa0001984 at 2013-08-17 18:46:58
不知道是尿素葡聚糖胶还是尿素聚丙烯酰胺胶,如果是后者,网上配方挺多,我一般用含有7M尿素的体系,加入loading dye之后95度温育5分钟再点样跑胶。希望对楼主有帮助~

尿素聚丙烯酰胺胶
胶的配方没问题
我想确认的是,loding buffer配方噢
4楼2013-08-18 12:00:49
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