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freezymind

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于EDC/NHS 请教各位大牛

最近在做Fe3O4-Au纳米粒子连赫赛汀(一种单克隆抗体药物)的实验,试了挺多遍都没有理想的结果,各位大牛帮忙看看哪里出问题了:
我的具体步骤:
1、5mg连有PEG-COOH纳米粒子溶于5ml水中,
2、加入固体EDC.HCL 220mg(文献上看来的,50、100mg也都试过)                        
sulfo-NHS 200mg(EDC.HCL/sulfo-NHS 1:1 5:1 10:1也都试过),调节PH至5.0左右,室温卵育15min(30min  1h 2h都试过),
3、硼砂缓冲液调节至7.0(亦曾试过用超滤管去除EDC NHS后调节PH)加入赫赛汀室温2h(室温过夜、4°2h过夜都试过)。

离心后没什么沉淀出来啊,文献上说会有沉淀出现的。请大牛们帮我看看哪里出问题了,感激不尽
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花未眠

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做好实验,好做实验
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sunshaokai

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
红舟流星: 金币+1, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-08-17 22:33:21
freezymind: 金币+5 2013-08-19 11:24:04
1.你这EDC和NHS加的也太多了吧?我们一般都是几十毫克材料加入几毫克足以。
2.你可以试一下,将50 mg PEG-COOH纳米粒子溶于PBS缓冲溶液中(7.0,中性或偏酸一点活性较好),加入10 mg EDC,10min后加入10 mg NHS(二者摩尔比为1:1即可,稍微多点少点影响不大),反应1h后加入赫赛汀。反应过夜。
5楼2013-08-17 15:00:03
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xingjiuwcc

木虫 (著名写手)

新手上路

顶顶

[ 发自小木虫客户端 ]
一朝踏上读研路,从此妹子是路人
2楼2013-08-17 00:08:04
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zyy880326

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
freezymind: 金币+1, ★有帮助, 金币较少,多多见谅哈 2013-08-17 12:14:34
freezymind: 金币+4, ★★★很有帮助, 感谢达人 2013-08-17 21:22:47
红舟流星: 金币+1, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-08-17 22:33:10
你看下这个贴:http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5331024 我觉得你的步骤有问题,一般不这样做吧。还有你的EDC.HCL/sulfo-NHS都是EDC的量高,是不是该NHS的量多投些吧。我最近也在调研文献,也要做这种反应,希望多交流下吧。
Tostrive,toseek,tofindandnottoyield.
3楼2013-08-17 09:36:42
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freezymind

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zyy880326 at 2013-08-17 09:36:42
你看下这个贴:http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5331024 我觉得你的步骤有问题,一般不这样做吧。还有你的EDC.HCL/sulfo-NHS都是EDC的量高,是不是该NHS的量多投些吧。我最近也在调研文献,也要做这种反应 ...

我看文献上基本上都是说EDC要过量的吧,下次可以试试NHS过量。还有我的步骤和链接上的没差别吧,我感觉我要陷入死胡同了。你觉得不妥的地方直接说出来嘛,
做好实验,好做实验
4楼2013-08-17 12:27:19
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