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zehego

木虫 (小有名气)

[求助] 请问用Western做co-ip,内参要如何设置,内参是必须的吗?

rt   咨询过好像做western的内参是必须的,那么做co-ip是不是也一样需要内参呢?  现在在一个新实验室,在做的一个co-ip实验好像没有设置内参,所以想来咨询一下  谢谢!
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zugur

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zehego at 2013-08-13 21:28:53
谢谢啊   不过还是觉得现在做的一塌糊涂  还没有理解coip的精髓。...

CO-IP用于检测细胞内的两个蛋白的相互作用,(就是A 和 B 有没有 interaction)

大概思路就是:提取细胞蛋白质,用A的抗体结合A,然后用beads沉降A,洗沉降物,然后用沉降物做western blot检测 B。
结果: 如果A 和B相互作用,就是一个complex,沉降A时,B也会被沉降下来,western blot就能测到;如果A和B没有相互作用,沉降A时,B不被沉降,沉降物的western blot中没有B的条带。

需要的参考量有:input(开始的细胞蛋白质提取,检测A,B 保证俩个蛋白质均正常表达), 上清液 (随便取得名字,针对的是沉降物而言的,沉降后分的两相,一个沉降物,一个就是它了,如果可以,把这个也点在你的western blot 中,这个一般文章里不需要,但是如果实验需要赶紧时,这个很有帮助)。
4楼2013-08-14 04:31:38
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zugur

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-13 09:15:10
好像没见过发表的文章里面 co-ip 结果还需要内参的。western blot需要内参作为加样量参考,co-ip结果需要的参考数据是体系中两个蛋白质都正常表达,不需要内参。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2013-08-13 06:05:04
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zehego

木虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by zugur at 2013-08-13 06:05:04
好像没见过发表的文章里面 co-ip 结果还需要内参的。western blot需要内参作为加样量参考,co-ip结果需要的参考数据是体系中两个蛋白质都正常表达,不需要内参。

谢谢啊   不过还是觉得现在做的一塌糊涂  还没有理解coip的精髓。
3楼2013-08-13 21:28:53
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