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zehego木虫 (小有名气)
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[求助]
请问用Western做co-ip，内参要如何设置，内参是必须的吗？
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| rt 咨询过好像做western的内参是必须的，那么做co-ip是不是也一样需要内参呢？ 现在在一个新实验室，在做的一个co-ip实验好像没有设置内参，所以想来咨询一下 谢谢！ |
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zehego
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 2 (幼儿园)
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- 散金: 14
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- 在线: 69.4小时
- 虫号: 999901
- 注册: 2010-04-18
- 专业: 蛋白质组学
送红花一朵 
3楼2013-08-13 21:28:53
2楼2013-08-13 06:05:04
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CO-IP用于检测细胞内的两个蛋白的相互作用，（就是A 和 B 有没有 interaction） 大概思路就是：提取细胞蛋白质，用A的抗体结合A，然后用beads沉降A，洗沉降物，然后用沉降物做western blot检测 B。 结果： 如果A 和B相互作用，就是一个complex，沉降A时，B也会被沉降下来，western blot就能测到；如果A和B没有相互作用，沉降A时，B不被沉降，沉降物的western blot中没有B的条带。 需要的参考量有：input（开始的细胞蛋白质提取，检测A,B 保证俩个蛋白质均正常表达）， 上清液 (随便取得名字，针对的是沉降物而言的，沉降后分的两相，一个沉降物，一个就是它了，如果可以，把这个也点在你的western blot 中，这个一般文章里不需要，但是如果实验需要赶紧时，这个很有帮助）。 |
4楼2013-08-14 04:31:38
