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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞计数“稀释倍数”相关问题
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小木虫刘树青

木虫 (著名写手)

夜未眠

[求助] 细胞计数“稀释倍数”相关问题已有1人参与

我查看了许多有关“细胞计数板使用方法”的介绍但都是，类型、计算公式方面的问题，而有关“稀释倍数”问题多是模糊带过。希望小木虫的高手帮我解惑！！！谢谢！！！
计算公式多为两种：
1、（细胞数）/ml=(四大格细胞数/4)*10^4*稀释倍数
2、（细胞数）/ml=(80小格细胞数/80)*10^4*稀释倍数  或  （细胞数）/ml=(100小格细胞数/100)*10^4*稀释倍数
问题是：假如细胞离心后用1ml重悬，再从中取100ul的重悬液，再加100ul的PBS稀释，这里是稀释了两倍吗？那么根据公式算出的是1ml重悬液的细胞数，还是100ul的细胞数啊？还有就是向载玻片上加细胞液时多少都无所谓是吧？只要不是太多就行是吧？
请高手详解“稀释倍数问题”，谢谢！！！
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世界上只有一种真正的英雄主义，那就是看清生活的真相之后，依然热爱生活。
1楼2013-08-11 19:27:14
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zugur

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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假如细胞离心后用1ml重悬，再从中取100ul的重悬液，再加100ul的PBS稀释，这里是稀释了两倍吗？--是的。
那么根据公式算出的是1ml重悬液的细胞数-----根据公式计算出来的是细胞浓度（不是细胞个数），而且是你稀释过的重悬液的浓度（表示稀释过后每1ml溶液里的细胞个数）。
向载玻片上加细胞液时 10-15 ul 最佳~
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6楼2013-08-13 06:20:02
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她城无岁月

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用不着那么复杂的吧 每次培养好的细胞取2ul   蓝色的液体4ul这样比例为1：3 之后混匀 全加入载玻片  进行细胞计数就可以了。
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2楼2013-08-11 23:04:05
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小木虫刘树青

木虫 (著名写手)

夜未眠
引用回帖:
2楼: Originally posted by 她城无岁月 at 2013-08-11 23:04:05
用不着那么复杂的吧 每次培养好的细胞取2ul   蓝色的液体4ul这样比例为1：3 之后混匀 全加入载玻片  进行细胞计数就可以了。

请问你仔细看问题了吗？你说的好像不是一回事！
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3楼2013-08-12 10:48:38
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reninhat

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
根据公式算出的1ml中的细胞数，那么10000倍就是测量格体积与1ml的比例
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4楼2013-08-12 12:43:32
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小木虫刘树青

木虫 (著名写手)

夜未眠
引用回帖:
4楼: Originally posted by reninhat at 2013-08-12 12:43:32
根据公式算出的1ml中的细胞数，那么10000倍就是测量格体积与1ml的比例

从总量中再取出部分只是为了稀释便于操作、节约，是吧？
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5楼2013-08-12 14:27:32
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
稀释倍数主要是为了使得细胞计数更加准确。
如果是离心重悬的计算公式，那么对应的只是重悬液中的细胞密度，原培养液中的细胞密度需要再进行计算。
如果是细胞密度计数，你可以不需要重悬，这样进行的稀释更加准确，而且计数更加准确。因为离心始终是有剪切力，会破坏细胞的。
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7楼2013-08-13 08:16:40
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小木虫刘树青

木虫 (著名写手)

夜未眠
引用回帖:
6楼: Originally posted by zugur at 2013-08-13 06:20:02
假如细胞离心后用1ml重悬，再从中取100ul的重悬液，再加100ul的PBS稀释，这里是稀释了两倍吗？--是的。
那么根据公式算出的是1ml重悬液的细胞数-----根据公式计算出来的是细胞浓度（不是细胞个数），而且是你稀释过 ...

您的意思是根据公式算出来的是200ul对应的1ml溶液的细胞数吗？但我觉得公式里面的“*稀释倍数”不就是算出后是稀释前的浓度吗？不然没有必要“*稀释倍数”了吧？
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世界上只有一种真正的英雄主义，那就是看清生活的真相之后，依然热爱生活。
8楼2013-08-13 14:13:19
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小木虫刘树青

木虫 (著名写手)

夜未眠
引用回帖:
7楼: Originally posted by wolfman840 at 2013-08-13 08:16:40
稀释倍数主要是为了使得细胞计数更加准确。
如果是离心重悬的计算公式，那么对应的只是重悬液中的细胞密度，原培养液中的细胞密度需要再进行计算。
如果是细胞密度计数，你可以不需要重悬，这样进行的稀释更加准确 ...

1、你的意思是用胰酶消化，DMEM终止消化后进行计数。但是如果要进行后续的实验，会不会有影响啊？
2、我知道是算的重悬后的细胞浓度。你的意思的只要不进行重悬直接进行测定就是比较接近原培养液的细胞浓度了是吗？
3、我上面说的是计算的“稀释前”的1ml溶液的细胞数吧？也就是100ul对应的1ml的细胞数是吧？而不是100+100=200ul所对应的1ml的细胞数吧？
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世界上只有一种真正的英雄主义，那就是看清生活的真相之后，依然热爱生活。
9楼2013-08-13 14:25:24
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organism

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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yqbter: 金币+2, 鼓励新虫发帖，多来生物科学版发帖！ 2013-08-20 15:36:01
2倍；1ml；最后刚好覆盖。
每格0.1ul，乘以10^4＝1ml，所以稀释倍数就是待测到滴加之间的稀释倍数。

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生命科学艺术
10楼2013-08-13 16:03:38
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