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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 我有一个关于无菌操作的疑问！
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放肆猫某人

铜虫 (小有名气)

[交流] 我有一个关于无菌操作的疑问！已有4人参与

这半个月一直在做提细菌DNA，顺便进行单菌落PCR的实验。
我觉得很奇怪的就是如果我在挑取单菌落至液体培养基内进行摇床培养，我怎么才能证明我操作过程中未染杂菌，每次培养在小管子里，直接观察起来差别好大，有的觉得整个液体浑浊度较为均匀，有的就是均匀，但是液体上面会有一层膜，还有的就是上面有一部分菌靠近液体上层，下面就还有部分菌沉淀，中间部分不怎么浑浊。总觉得是污染了醋酸杆菌。因为菌种为芽孢杆菌，试过进行芽孢染色镜检，效果却很不理想，都是杆菌，而且杆状有长有短，老师说在液体培养基的杆菌会有的长有的短，有的长的还可能是短的连一起了，而且只培养差不多15个小时左右，芽孢又不多，根本不能辨别是否染菌，如果染菌了，PCR的产物很可能有污染，拿去测序岂不就是杂菌的序列吗？测序又贵，老师又是那种特别节约的人，真怕浪费他钱，结果测出来还是个错的！等着挨骂啊！
而且现在老师让我跟另外一个老师专门学技术，可是那老师根本就不怎么教我啊，每次都让我自己做，不懂问跟他做实验的学生，自己慢慢摸索，出了结果再找他。结果出了结果找他，他让我自己寄去上海，一个礼拜之后他告诉我，温度太高没测出来，让我再做一次，我继续做了然后问他要不要用冰袋什么的，他却又说不用，那温度不还是会很高啊。现在正在等着第二次的结果，多说都是泪啊！
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1楼2013-08-07 14:10:32
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

stephenreal

至尊木虫 (著名写手)
★
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三个字：加对照。这个不能怕麻烦的。空白、阴性对照都该齐全，这样就有说服力了，而且有问题也知道从哪里去追根溯源了。
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2楼2013-08-07 15:39:42
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zhsp07

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
拿摇出来的菌液涂个平板，看看是否有杂菌。如果没有的话，单就提DNA、PCR过程中，空气中的杂菌是不足以对PCR结果带来影响的。
另外，楼主是做微生物的，应该对自己的无菌操作技术有自信啊，不能老是担心有污染。一般来说，只要操作规范，不会染菌的。另外，在保证规范的前提下，尽可能速度快一下，天下武功唯快不破，放到做实验上也是一样的。
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车到山前必有路!
4楼2013-08-08 10:49:44
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swnz

木虫 (小有名气)
★ ★
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amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流！ 2013-08-07 20:59:07
貌似你们条件比较差，没有一个熟手帮助，困难重重。是否污染应该容易判断的，这是做微生物操作的基本要求。一般通过镜检，油镜观察形态。很多时候要凭经验。
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跟着感觉走
3楼2013-08-07 15:42:30
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放肆猫某人

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stephenreal at 2013-08-07 15:39:42
三个字：加对照。这个不能怕麻烦的。空白、阴性对照都该齐全，这样就有说服力了，而且有问题也知道从哪里去追根溯源了。

有哪些地方需要做对照的啊 主要是我感觉是我无菌操作的问题 这个已经是个问题了 还能对照吗···
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5楼2013-08-09 18:38:34
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放肆猫某人

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by swnz at 2013-08-07 15:42:30
貌似你们条件比较差，没有一个熟手帮助，困难重重。是否污染应该容易判断的，这是做微生物操作的基本要求。一般通过镜检，油镜观察形态。很多时候要凭经验。

就是凭的感觉啊 油镜下也感觉看不清  区分不了 就算菌体上没有芽孢 也不能判断究竟是否染菌 而且学校地方比较偏僻 要寄去上海测序 最近温度很高 DNA都降解了 都不知道怎么办 觉得白提了 放假这么久了都没回家的 每次寄去上海都要隔一个礼拜才有消息 很无奈 不知道什么时候才是个头
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6楼2013-08-09 18:41:58
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放肆猫某人

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhsp07 at 2013-08-08 10:49:44
拿摇出来的菌液涂个平板，看看是否有杂菌。如果没有的话，单就提DNA、PCR过程中，空气中的杂菌是不足以对PCR结果带来影响的。
另外，楼主是做微生物的，应该对自己的无菌操作技术有自信啊，不能老是担心有污染。一 ...

恩 最后那句话觉得很对 以后会多学习学习的 我是本科生 马上升大三了 觉得还有很多东西要学  还是不自信 主要是导师太节省了 我都怕浪费他钱 现在温度太高 每次寄去上海测序 就说温度太高降解了 感觉暑假一直没回家 帮着老师做实验 什么都没做出来 一切都白搭了
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7楼2013-08-09 18:45:05
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stephenreal

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 放肆猫某人 at 2013-08-09 18:38:34
有哪些地方需要做对照的啊 主要是我感觉是我无菌操作的问题 这个已经是个问题了 还能对照吗···...

用灭菌水作空白对照，空载体菌作阴性对照

[ 发自小木虫客户端 ]
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8楼2013-08-09 18:48:05
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放肆猫某人

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by stephenreal at 2013-08-09 18:48:05
用灭菌水作空白对照，空载体菌作阴性对照
...

额 我能不能弱弱的问句 空载菌体是神马 我就是一普通二本的大三学生~麻烦您了~
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9楼2013-08-09 18:57:23
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匿名

用户注销 (知名作家)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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10楼2013-08-09 20:01:29
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