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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 我有一个关于无菌操作的疑问！
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stephenreal

至尊木虫 (职业作家)
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9楼: Originally posted by 放肆猫某人 at 2013-08-09 18:57:23
额 我能不能弱弱的问句 空载菌体是神马 我就是一普通二本的大三学生~麻烦您了~...

不好意思，看走眼了。你只需要以灭菌水或培养液作为空白对照，这个不长菌及PCR扩增阴性的话，说明你操作无误，放心相信你的实验结果好了。

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11楼2013-08-09 20:38:51
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swnz

木虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by 放肆猫某人 at 2013-08-09 18:41:58
就是凭的感觉啊 油镜下也感觉看不清  区分不了 就算菌体上没有芽孢 也不能判断究竟是否染菌 而且学校地方比较偏僻 要寄去上海测序 最近温度很高 DNA都降解了 都不知道怎么办 觉得白提了 放假这么久了都没回家的 每 ...

除了镜检外，你可以把培养物用接种环在YB平板上划线，尽量划出较多的单菌落。37度培养两天后鉴别菌落形态是否一致，不一致的话，就是污染。因为你可以先把12h左右的菌液取出离心，沉淀冻在冰箱里。如果觉得没有污染，再提基因组DNA不迟。测序公司在大的城市都有，没有必要一定选上海。DNA也可以干燥后寄出，稳定性好些。
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跟着感觉走
12楼2013-08-09 21:29:14
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放肆猫某人

铜虫 (小有名气)
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11楼: Originally posted by stephenreal at 2013-08-09 20:38:51
不好意思，看走眼了。你只需要以灭菌水或培养液作为空白对照，这个不长菌及PCR扩增阴性的话，说明你操作无误，放心相信你的实验结果好了。
...

无菌水和培养液是指PCR的时候用的吗 我都是扩增16s rDNA，所以就算染杂菌 片段大小也差不多 电泳看不出来的~其实没怎么明白你的意思 怎么会不长菌啊 我需要挑去单菌落PCR的~大神 求助~
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13楼2013-08-09 21:41:28
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放肆猫某人

铜虫 (小有名气)
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12楼: Originally posted by swnz at 2013-08-09 21:29:14
除了镜检外，你可以把培养物用接种环在YB平板上划线，尽量划出较多的单菌落。37度培养两天后鉴别菌落形态是否一致，不一致的话，就是污染。因为你可以先把12h左右的菌液取出离心，沉淀冻在冰箱里。如果觉得没有污染 ...

我送的是PCR的产物 也能干燥吗？ 一定要在YB平板吗 牛肉膏蛋白胨不行吗~
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14楼2013-08-09 21:43:17
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放肆猫某人

铜虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by shangyukuan at 2013-08-09 20:01:29
小MM你学校在哪里呀？干嘛非要寄到上海来呀？

湖南怀化 湘西部这边~老师东西都是买的上海生工滴~
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15楼2013-08-09 21:47:01
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匿名

用户注销 (知名作家)
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16楼2013-08-09 22:00:27
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swnz

木虫 (小有名气)
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14楼: Originally posted by 放肆猫某人 at 2013-08-09 21:43:17
我送的是PCR的产物 也能干燥吗？ 一定要在YB平板吗 牛肉膏蛋白胨不行吗~...

PCR产物如果没有杂带，就可以用乙醇加入乙酸钠沉淀回收，不需要用TE溶解，吹干后即可送出去测序（参见小木虫【求助/交流】200bpDNA片段回收效率低）。如果有杂带，就要用胶回收方法，用试剂盒回收DNA，然后用同上方法乙醇沉淀。注意，乙醇沉淀回收时加入乙酸钠（终浓度为0.3M），是为了促进沉淀。-20度放置一夜后，高速离心得到沉淀，用75%乙醇洗涤2次，再凉干。这个方法虽然我自己没有用过（都是以液态状态送出去），但是原理上是可行的，很多帖子上也都有。有兴趣的话可以试一试。至于平板培养基，不需要限定LB。
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跟着感觉走
17楼2013-08-10 08:00:24
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放肆猫某人

铜虫 (小有名气)
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16楼: Originally posted by shangyukuan at 2013-08-09 22:00:27
奥，不行就冷链运输吧，...

什么快递公司 贵不贵啊~
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18楼2013-08-10 21:01:53
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放肆猫某人

铜虫 (小有名气)
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17楼: Originally posted by swnz at 2013-08-10 08:00:24
PCR产物如果没有杂带，就可以用乙醇加入乙酸钠沉淀回收，不需要用TE溶解，吹干后即可送出去测序（参见小木虫【求助/交流】200bpDNA片段回收效率低）。如果有杂带，就要用胶回收方法，用试剂盒回收DNA，然后用同上方 ...

好专业的样子 我不会切胶啊 小小本科生 很多都不会 我的是1500bp左右的片段 不是说回收效率低吗 如果是沉淀的话 遇到天气炎热也没关系吗 非常谢谢你!!!
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19楼2013-08-10 21:03:49
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swnz

木虫 (小有名气)
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19楼: Originally posted by 放肆猫某人 at 2013-08-10 21:03:49
好专业的样子 我不会切胶啊 小小本科生 很多都不会 我的是1500bp左右的片段 不是说回收效率低吗 如果是沉淀的话 遇到天气炎热也没关系吗 非常谢谢你!!!...

产物够多的话，回收不成问题。沉淀的时候，要放在-20度。
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放肆猫某人
跟着感觉走
20楼2013-08-10 22:10:06
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