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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用酚氯仿法提鱼鳍的DNA,死活提不出来，求指教
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孤城一片

木虫 (小有名气)

[求助] 用酚氯仿法提鱼鳍的DNA,死活提不出来，求指教 已有3人参与

先说一下我的步骤，大家看看
1.取50到100微克组织样，加600ul组织提取液，加20ul蛋白酶K，55度消化至澄清。
2.加600ul酚：氯仿异：异戊醇，此步抽提两次
3.十分之一体积3M乙酸钠，加两倍体积冷乙醇沉淀30min，4度离心8000r 5min
4.百分之七十冷乙醇洗两次
5.100-200ul溶沉淀
请各位给点意见，现在都快提吐了
用酚氯仿法提鱼鳍的DNA,死活提不出来，求指教
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本意探花郎，奈何芷若香；寄意予青陆，共沐好蟾光。
1楼 2013-08-01 07:09:06
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

一直寂寞的鱼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-08-01 16:20:09
考虑下你的试剂是否过期或者损坏
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幸福永远
2楼2013-08-01 10:30:05
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普通回帖

akailiu

木虫 (著名写手)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-08-01 16:20:19
是不是太用力振荡了，片段都打碎了！
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3楼2013-08-01 11:06:57
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孤城一片

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 一直寂寞的鱼 at 2013-08-01 10:30:05
考虑下你的试剂是否过期或者损坏

过期不至于，刚配的，损坏？不确定，有这么脆弱吗

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本意探花郎，奈何芷若香；寄意予青陆，共沐好蟾光。
4楼2013-08-01 11:09:30
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孤城一片

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by akailiu at 2013-08-01 11:06:57
是不是太用力振荡了，片段都打碎了！

抽提是是用力晃了，到不至于上边那么干净吧，这几次都这样，很是纠结

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本意探花郎，奈何芷若香；寄意予青陆，共沐好蟾光。
5楼2013-08-01 11:11:33
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523069653

银虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-08-01 16:20:30
楼主 我也是提鳍条的DNA的 但是我用的是试剂盒  很容易提出来的
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6楼2013-08-01 11:18:26
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akailiu

木虫 (著名写手)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-08-01 16:20:38
没看清楚点样孔在上还是下，如果是在上面的话，下面这么一大片小片段，到像是RNA!
建议提取基因组时别太用力，另外用乙醇沉淀时间，最好在-20度2小时以上，或者用异丙醇沉淀半小时，沉淀离心在12000以上！
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7楼2013-08-01 11:31:04
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孤城一片

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by akailiu at 2013-08-01 11:31:04
没看清楚点样孔在上还是下，如果是在上面的话，下面这么一大片小片段，到像是RNA!
建议提取基因组时别太用力，另外用乙醇沉淀时间，最好在-20度2小时以上，或者用异丙醇沉淀半小时，沉淀离心在12000以上！

点样孔在上边，下面是RNA,我是静置了半个小时，谢谢建议，能不能把你们的方法步骤说一下，现在很是困惑了

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本意探花郎，奈何芷若香；寄意予青陆，共沐好蟾光。
8楼2013-08-01 11:44:42
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孤城一片

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 523069653 at 2013-08-01 11:18:26
楼主 我也是提鳍条的DNA的 但是我用的是试剂盒  很容易提出来的

你用的是什么试剂盒？最近很是纠结
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本意探花郎，奈何芷若香；寄意予青陆，共沐好蟾光。
9楼2013-08-01 13:21:23
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睿智的锐志

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-08-01 16:20:52
1.多取点样品组织样，
3.4度离心8000r 5min （注意是多少g?）
感觉是样品离心力不够
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10楼2013-08-01 15:38:31
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