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cj黑甲虫

新虫 (初入文坛)

[求助] 转膜不成功

同时做了两块胶,相同的进样。一块用于考染,另一块用于转膜。考染的出现了清晰的蛋白条带。另一块胶用于转膜,转印后,PVDF膜上有条带清晰的预染Marker,但是用丽春红染液对的PVDF膜及胶进行染色,均未发现任何条带。
蛋白去了那里?求解!
转印条件:Bio-Rad湿转,300MA,1h,冰浴,分子量20、40、60、80KDa,PVDF膜。
另:之前用过同样的转印条件,转膜成功过。
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jiang701820

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cj黑甲虫: 金币+2, 有帮助, 同一批次的立春红染液,在之前染色的时候成功了 2013-08-09 09:37:50
考马斯亮蓝染色比立春红染色灵敏不止一点点,但是据楼主说立春红染色一点东西都没有我觉得不像是load太少,因为总有表达丰度高的蛋白的,转膜时marker都转到膜上了,所以说转膜应该也没问题,个人觉得很有可能是立春红配错了,或者失效了!
重新配立春红,再试一试,一定要注意加冰醋酸!
6楼2013-08-01 17:16:41
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cj黑甲虫: 金币+5, 有帮助, 因为WESTERN没有条带才查了PVDF膜,结果就出现了我刚才的疑问 2013-07-30 09:20:43
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-31 09:19:03
如果mark清晰,那说明转膜是没哟问题的,如果你丽春红染液没看到条带的话,有可能是你load量不够,因为丽春红染液灵敏度似乎不是很高,不过做western的话应该没太大问题!Good luck!
互助互励,共奋共进!!
2楼2013-07-29 21:54:10
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xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cj黑甲虫: 金币+2, 有帮助, 谢谢回帖 2013-07-30 09:21:16
我只能说,倒过去查一遍,没错的话,重来一遍
越学越无知
3楼2013-07-29 21:54:24
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cauxiaobear

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
cj黑甲虫: 金币+1, 不知道在说什么 2013-08-09 09:36:39
mei yongguo zhge ranliao.
bu tai qingchu
buguo chongzuo shi zuijia xuanze
4楼2013-07-30 15:15:14
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