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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转膜不成功
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cj黑甲虫

新虫 (初入文坛)

[求助] 转膜不成功

同时做了两块胶，相同的进样。一块用于考染，另一块用于转膜。考染的出现了清晰的蛋白条带。另一块胶用于转膜，转印后，PVDF膜上有条带清晰的预染Marker，但是用丽春红染液对的PVDF膜及胶进行染色，均未发现任何条带。
蛋白去了那里？求解！
转印条件：Bio-Rad湿转，300MA，1h，冰浴，分子量20、40、60、80KDa，PVDF膜。
另：之前用过同样的转印条件，转膜成功过。
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1楼 2013-07-29 21:01:07
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cj黑甲虫: 金币+5, ★有帮助, 因为WESTERN没有条带才查了PVDF膜，结果就出现了我刚才的疑问 2013-07-30 09:20:43
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-31 09:19:03
如果mark清晰，那说明转膜是没哟问题的，如果你丽春红染液没看到条带的话，有可能是你load量不够，因为丽春红染液灵敏度似乎不是很高，不过做western的话应该没太大问题！Good luck！
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互助互励，共奋共进！！
2楼2013-07-29 21:54:10
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xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cj黑甲虫: 金币+2, ★有帮助, 谢谢回帖 2013-07-30 09:21:16
我只能说，倒过去查一遍，没错的话，重来一遍
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越学越无知
3楼2013-07-29 21:54:24
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cauxiaobear

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cj黑甲虫: 金币+1, 不知道在说什么 2013-08-09 09:36:39
mei yongguo zhge ranliao.
bu tai qingchu
buguo chongzuo shi zuijia xuanze
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4楼2013-07-30 15:15:14
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ytflark

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
膜的厚度不知道？你转的时间太长！
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11
5楼2013-08-01 14:49:53
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jiang701820

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cj黑甲虫: 金币+2, ★有帮助, 同一批次的立春红染液，在之前染色的时候成功了 2013-08-09 09:37:50
考马斯亮蓝染色比立春红染色灵敏不止一点点，但是据楼主说立春红染色一点东西都没有我觉得不像是load太少，因为总有表达丰度高的蛋白的，转膜时marker都转到膜上了，所以说转膜应该也没问题，个人觉得很有可能是立春红配错了，或者失效了！
重新配立春红，再试一试，一定要注意加冰醋酸！
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6楼2013-08-01 17:16:41
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红飞侠

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
cj黑甲虫: 金币+2, ★有帮助, 同楼上 2013-08-09 09:38:19
我觉得丽春红可能有问题，考染的胶没有问题，转膜的Marker也清晰，说明转膜应该是成功的，最好重新配置丽春红，重做一次。加油！
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好的资源共同分享
7楼2013-08-02 14:11:24
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