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大肠杆菌工程菌发酵染菌问题解决方案
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本人现在正做大肠杆菌工程菌的发酵实验，目前遇到一个比较棘手的问题，特来此地求助，忘广大战友鼎力相助，小弟先行谢过： 我遇到的问题是：在发酵试验中，按照给出的既定方案，先做摇瓶验证， 然后上发酵罐，做小试，问题就出在这里，在摇瓶中，按照给出的方案，从来没有染菌，但是最近做了好几次发酵罐的验证实验，但是每次不管是种子罐还是发酵罐都染菌，方案给出的培养条件是：摇瓶的培养是种子瓶32℃，220rpm条件下培养40小时，按照这个条件，从没染菌，但是只要上罐子，都要染菌，但是，在罐子中，种子罐中，接种前有取消后样看是否染菌，确定没染菌才接种，接种后的一天，取样看，还是没染菌，可是到了30几个小时到转发酵罐的时候取样，发现染菌都特别厉害，每次都是这样，用种子瓶直接转发酵罐，在发酵罐中同样存在这个问题，我想了好久，都没想明白到底是哪里出了问题，所以来此救助，感谢各位大神。。。。。 |
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 大肠杆菌工程菌发酵 |
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6楼2014-04-11 10:49:04
2楼2013-07-28 07:50:14
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
错爱一生: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-28 16:16:02
感谢参与，应助指数 +1
错爱一生: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-28 16:16:02
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1、我认为摇瓶发酵只是为了摸索一下上罐发酵的控制过程条件和寻找一株相对有潜力的工程菌株，和上罐发酵过程染菌并没有直接关系，他们的关系只存在于放大过程中的不适合与调整。 2、从你的描述看出，一般的染菌出现在种子转接发酵过程中，我认为很有可能的原因有如下3个： a、发酵罐的灭菌过程不彻底，你可以选择如下方式灭菌，先空消在实消，这样灭菌相对彻底； b、从种子罐接入发酵罐的过程中的操作，我不是很清楚你的发酵罐有多大是实验的小试还是生产，但是看你说从摇瓶直接转入发酵罐来看，这一切的操作是不是在接种口处外接火焰圈进行的，如果是，是不是在这个操作过程引入了杂菌； c、空气系统是一个很有可能的原因，通入的无菌空气应该是经过膜过滤的，滤膜是否太久，没有了过滤的作用，可以在进罐前再添加一个高温过滤的设备。 一般我们实验室的应对策略：先进行3-5天的实验室熏蒸，清洁发酵间的卫生，对发酵设备进行检查更新在尝试发酵过程，现在天气比较热，本身就是一些杂菌的活跃期，一般工厂在这个阶段都会停产，若还是不行可以考虑天气冷一些的时间再做，住实验顺利！ |
3楼2013-07-28 11:04:27
4楼2013-07-28 16:14:18
