13楼: Originally posted by windycui at 2013-07-20 10:25:26
楼主，其实PCR做不出有很多原因的，有时候可能不是你的反应体系或者反应条件的问题，有时可能真的是运气问题。我的建议是退火温度减5度，然后在正负2~3度之间做梯度，循环数增加到30个，然后两台PCR仪同时做一样的条 ...

14楼: Originally posted by 孙启亮 at 2013-07-20 10:49:24
谢耳朵楼主：
      感觉最有可能就是引物问题，用引物blast验证一下吧

17楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-07-20 12:28:52
大概看了一下前面几楼的回复，其实应该基本都把问题点出来了，我就建议楼主注意几点：
1. 优化PCR条件，做温度梯度PCR，可以同时在不同的退火温度下反应，很容易学的。13楼说的很好，就在你认为最合适的Tm值上下2~ ...

18楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-07-20 12:32:06
另外，若楼主问题解决了，希望能跟大家分享一下经验，多多交流~赠人玫瑰，手有余香！祝好！

19楼: Originally posted by hyphen007 at 2013-07-20 13:46:39
是什么带都没有吗？根据你的目的片段长度，会不会延伸时间过短？

27楼: Originally posted by alicelchf at 2013-07-20 18:48:42
你说一下你的加样量，各个成分
72°C 可以1.5min

28楼: Originally posted by 夏财神 at 2013-07-20 18:58:58
我试一下1.5min，做的时候搞了四个目的片段，分别四600,1000,1200，1400~ 所以用了1min，下次我单独做做看，先p出一个再说。谢谢！
50uL体系：40 ddH2O；5uL 10X buffer；1uL Primer X 2; 1uL 模板；0.5 uL rTaq( ...

29楼: Originally posted by alicelchf at 2013-07-20 19:09:44
如果你只需要先看看p出来没有，你可以25ul体系
另外，我不知道你的primer是多少的浓度，如果10um 你这个量是没有问题的
关键的还是反应各个时间和浓度 hehe...