31楼: Originally posted by kzkz1015 at 2013-07-20 22:06:26
延伸时间延长到90s试一下,实在不行菌液PCR,再不行的话重新设计引物吧

29楼: Originally posted by alicelchf at 2013-07-20 19:09:44
如果你只需要先看看p出来没有，你可以25ul体系
另外，我不知道你的primer是多少的浓度，如果10um 你这个量是没有问题的
关键的还是反应各个时间和浓度 hehe...

33楼: Originally posted by 夏财神 at 2013-07-21 15:37:56
刚刚算了算，Primer的浓度时50uM，终浓度是1uM，正好处在takara那个酶说明书的上限，应该可以吧...

36楼: Originally posted by hyc_charles at 2013-07-22 18:42:26
楼主，我可以告诉你一个秘密，其实你做了一段时间的PCR以后你会发现，有些模板和引物，不论你如何调整PCR条件，不论你如何更换试剂，你都无法P出你要的目的条带，或者时有时无。我不知道大家有没有这种感受，我曾经 ...

35楼: Originally posted by bluecave at 2013-07-22 14:16:43
这种情况我也遇到过，如果没有别的失误，我估计你是酶用的不对，我曾经调一个2000bp左右的基因死活调不出来，最后用LA taq做出来了，虽然说普通的taq酶理论上能扩3k，但有时候事情就这么奇葩。你可以把pyrobest和LA ...

39楼: Originally posted by 夏财神 at 2013-07-22 21:59:28
多谢各位虫友的帮助，现在已经做出了初步结果。现在分享一下经验。

1、发现做不出条带之后，跟同学讨论了下，做了模板DNA的电泳，发现23K有条带，初步排除了DNA模板的问题。
2、根据虫友的意见，Blast了引物的特 ...