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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我用sal Ⅰ和xho Ⅰ双酶切链接目的基因，菌落pcr能p出目的条带，但酶切切不开。
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blueghost2

新虫 (小有名气)

[求助] 我用sal Ⅰ和xho Ⅰ双酶切链接目的基因，菌落pcr能p出目的条带，但酶切切不开。

后来知道这两个酶是同尾酶，目的片段连反了。怎么办啊，求指教！！！
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1楼 2013-07-17 13:47:35
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zyllucky

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
blueghost2(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-07-18 14:20:57
gyesang: 回帖置顶 2013-07-18 14:21:06
多挑些克隆质粒小提，然后小量酶切筛选，能切的是对的，不能切的是错的。不过要还是用这两个酶切下来的话，你往其它质粒连还是有同样问题啊。两手准备吧，边筛边设计引物换酶切位点重新做
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糊涂仙儿
18楼2013-07-18 12:16:42
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
blueghost2: 金币+2 2013-07-17 15:29:25
两个建议，1，换酶切位点，2 ，多挑一些克隆子，验证，运气好也可以挑到正确的
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2楼2013-07-17 14:29:29
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blueghost2

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huanghznd at 2013-07-17 14:29:29
两个建议，1，换酶切位点，2 ，多挑一些克隆子，验证，运气好也可以挑到正确的

换酶切位点太麻烦还得重新设计引物。我目前一直在挑斑，希望运气好一点。。
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3楼2013-07-17 15:29:17
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by blueghost2 at 2013-07-17 15:29:17
换酶切位点太麻烦还得重新设计引物。我目前一直在挑斑，希望运气好一点。。...

对于你的挑选，建议用目的基因的引物进行菌体PCR验证，插反就是扩增质粒片段，插正确就是扩增目的基因片段。因为都在同一个载体环上嘛。
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4楼2013-07-17 15:41:26
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