24小时热门版块排行榜    

查看: 3045  |  回复: 31

ljj0720

银虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-07-04 18:41:51
不太好,最好不要这样可丁可卯的设计,可以向前和向后多延伸一些,只要包含就可以,上游和下游的引物还要加酶切位点呢!...

最好不要这样可丁可卯的设计是什么意思 您可以说的具体一点吗 谢谢 上游和下游的引物还要加酶切位点这个我知道 还要加保护碱基 。向前和向后多延伸一些  那扩增的还是我的基因全长吗
11楼2013-07-04 18:55:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-07-04 18:41:51
不太好,最好不要这样可丁可卯的设计,可以向前和向后多延伸一些,只要包含就可以,上游和下游的引物还要加酶切位点呢!...

大侠帮忙解决一下吧  我已经整了几天了
12楼2013-07-04 18:56:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-07-04 18:22:17
那如果选择密码子后面的碱基作为引物 那样扩增出来的  还是原来基因吗 我刚刚做  所以好多不懂  希望您可以指导一下 谢谢...

上下游引物一起来保证特异性,通常得到的还是原来的基因,只是比单纯的编码区长一些。
为什么
13楼2013-07-04 19:10:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 547star at 2013-07-04 19:10:52
上下游引物一起来保证特异性,通常得到的还是原来的基因,只是比单纯的编码区长一些。...

我目的是要扩增出来后  做蛋白 比单纯的编码区长一些  那样能得到目的蛋白吗
14楼2013-07-04 19:16:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-07-06 01:59:20
引用回帖:
14楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-07-04 19:16:14
我目的是要扩增出来后  做蛋白 比单纯的编码区长一些  那样能得到目的蛋白吗...

没问题。翻译的时候到终止密码子就结束了。天然的基因都能表达,你不过是扩增出来克隆到表达载体表达而已。克隆表达时要注意读码框正确。抽空补一下分子生物学的基础知识吧,欠缺太多,会有各种问题,这个时候读书效率比上论坛高很多。
为什么
15楼2013-07-04 19:31:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 547star at 2013-07-04 19:31:38
没问题。翻译的时候到终止密码子就结束了。天然的基因都能表达,你不过是扩增出来克隆到表达载体表达而已。克隆表达时要注意读码框正确。抽空补一下分子生物学的基础知识吧,欠缺太多,会有各种问题,这个时候读书 ...

嗯 好的 谢谢
16楼2013-07-04 19:36:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhs521521

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-07-04 18:56:45
大侠帮忙解决一下吧  我已经整了几天了 ...

不好意思,刚才有事出去了,解决了吗?
寻找真正的自我!
17楼2013-07-04 21:13:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小love肖

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-05 14:56:18
你的序列中GC含量太少了,上下游引物中GC含量更少,估计不太好扩增,你可以选择载体上的序列设计引物先扩增,然后再酶切下来你要的序列再克隆就行了,下面是我设计的引物,有点长,但是也没办法,你可以看看
上游引物   (保护碱基)酶切位点+GCCGCCACC+atgagttttaggataaatac(5‘-3’)
下游引物      (保护碱基)酶切位点+ TTATTGTAAAAGCCTTAAGAC(5‘-3’)
GC含量在30左右,Tm值为40
18楼2013-07-05 12:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-07-04 21:13:10
不好意思,刚才有事出去了,解决了吗?...

还没有
19楼2013-07-05 21:27:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 小love肖 at 2013-07-05 12:38:07
你的序列中GC含量太少了,上下游引物中GC含量更少,估计不太好扩增,你可以选择载体上的序列设计引物先扩增,然后再酶切下来你要的序列再克隆就行了,下面是我设计的引物,有点长,但是也没办法,你可以看看
上游引 ...

谢谢大侠  下游引物我看懂了  但是上游引物 +GCCGCCACC是怎么来的  它不是基因序列里面的  能作为引物吗  如果能 那么扩增来  不就不是我原来的序列了吗
20楼2013-07-05 21:30:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ljj0720 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +13 晴天加油 2026-08-26 14/700 2026-08-28 18:36 by huagongfeihu
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
请填处理意见