应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆表达 引物设计
322/4返回列表上一页1234下一页
查看: 2976  |  回复: 31
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-07-04 18:41:51
不太好，最好不要这样可丁可卯的设计，可以向前和向后多延伸一些，只要包含就可以，上游和下游的引物还要加酶切位点呢！...

最好不要这样可丁可卯的设计是什么意思 您可以说的具体一点吗 谢谢 上游和下游的引物还要加酶切位点这个我知道 还要加保护碱基 。向前和向后多延伸一些  那扩增的还是我的基因全长吗
赞一下 回复此楼
11楼2013-07-04 18:55:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-07-04 18:41:51
不太好，最好不要这样可丁可卯的设计，可以向前和向后多延伸一些，只要包含就可以，上游和下游的引物还要加酶切位点呢！...

大侠帮忙解决一下吧  我已经整了几天了
赞一下 回复此楼
12楼2013-07-04 18:56:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-07-04 18:22:17
那如果选择密码子后面的碱基作为引物 那样扩增出来的  还是原来基因吗 我刚刚做  所以好多不懂  希望您可以指导一下 谢谢...

上下游引物一起来保证特异性，通常得到的还是原来的基因，只是比单纯的编码区长一些。
赞一下 回复此楼
为什么
13楼2013-07-04 19:10:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 547star at 2013-07-04 19:10:52
上下游引物一起来保证特异性，通常得到的还是原来的基因，只是比单纯的编码区长一些。...

我目的是要扩增出来后  做蛋白 比单纯的编码区长一些  那样能得到目的蛋白吗
赞一下 回复此楼
14楼2013-07-04 19:16:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-07-06 01:59:20
引用回帖:
14楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-07-04 19:16:14
我目的是要扩增出来后  做蛋白 比单纯的编码区长一些  那样能得到目的蛋白吗...

没问题。翻译的时候到终止密码子就结束了。天然的基因都能表达，你不过是扩增出来克隆到表达载体表达而已。克隆表达时要注意读码框正确。抽空补一下分子生物学的基础知识吧，欠缺太多，会有各种问题，这个时候读书效率比上论坛高很多。
赞一下 回复此楼
为什么
15楼2013-07-04 19:31:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 547star at 2013-07-04 19:31:38
没问题。翻译的时候到终止密码子就结束了。天然的基因都能表达，你不过是扩增出来克隆到表达载体表达而已。克隆表达时要注意读码框正确。抽空补一下分子生物学的基础知识吧，欠缺太多，会有各种问题，这个时候读书 ...

嗯 好的 谢谢
回复此楼
16楼2013-07-04 19:36:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhs521521

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-07-04 18:56:45
大侠帮忙解决一下吧  我已经整了几天了 ...

不好意思，刚才有事出去了，解决了吗？
赞一下 回复此楼
寻找真正的自我！
17楼2013-07-04 21:13:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小love肖

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-05 14:56:18
你的序列中GC含量太少了，上下游引物中GC含量更少，估计不太好扩增，你可以选择载体上的序列设计引物先扩增，然后再酶切下来你要的序列再克隆就行了，下面是我设计的引物，有点长，但是也没办法，你可以看看
上游引物   （保护碱基）酶切位点+GCCGCCACC+atgagttttaggataaatac（5‘-3’）
下游引物      （保护碱基）酶切位点+ TTATTGTAAAAGCCTTAAGAC（5‘-3’）
GC含量在30左右，Tm值为40
赞一下 回复此楼
18楼2013-07-05 12:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-07-04 21:13:10
不好意思，刚才有事出去了，解决了吗？...

还没有
回复此楼
19楼2013-07-05 21:27:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 小love肖 at 2013-07-05 12:38:07
你的序列中GC含量太少了，上下游引物中GC含量更少，估计不太好扩增，你可以选择载体上的序列设计引物先扩增，然后再酶切下来你要的序列再克隆就行了，下面是我设计的引物，有点长，但是也没办法，你可以看看
上游引 ...

谢谢大侠  下游引物我看懂了  但是上游引物 +GCCGCCACC是怎么来的  它不是基因序列里面的  能作为引物吗  如果能 那么扩增来  不就不是我原来的序列了吗
赞一下 回复此楼
20楼2013-07-05 21:30:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ljj0720 的主题更新
322/4返回列表上一页1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ANUsWpSnuWQD 2026-08-06 4/200 2026-08-07 04:46 by nSM3ys5fefM3
[基金申请] 听说今天filecode变了 +19 布布和一二 2026-08-06 34/1700 2026-08-07 03:13 by 虫友是什么虫
[基金申请] 基金中了 +6 laoda193707 2026-08-06 6/300 2026-08-06 23:34 by dragonxp
[基金申请] filecode +10 等待解的谜 2026-08-06 14/700 2026-08-06 21:16 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +3 archvillain 2026-08-06 7/350 2026-08-06 21:05 by archvillain
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 6/300 2026-08-06 20:19 by 苏知砚
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 12/600 2026-08-06 15:11 by eddyin
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[教师之家] 咨询面上基金 +4 李长云 2026-07-31 7/350 2026-08-06 11:20 by 李长云
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +22 低垂的野花 2026-07-31 30/1500 2026-08-05 18:03 by 低垂的野花
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +3 哈哈114477 2026-08-01 3/150 2026-08-04 15:40 by tegsgjy20
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭