10楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-07-04 18:41:51
不太好，最好不要这样可丁可卯的设计，可以向前和向后多延伸一些，只要包含就可以，上游和下游的引物还要加酶切位点呢！...

10楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-07-04 18:41:51
不太好，最好不要这样可丁可卯的设计，可以向前和向后多延伸一些，只要包含就可以，上游和下游的引物还要加酶切位点呢！...

9楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-07-04 18:22:17
那如果选择密码子后面的碱基作为引物 那样扩增出来的  还是原来基因吗 我刚刚做  所以好多不懂  希望您可以指导一下 谢谢...

13楼: Originally posted by 547star at 2013-07-04 19:10:52
上下游引物一起来保证特异性，通常得到的还是原来的基因，只是比单纯的编码区长一些。...

14楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-07-04 19:16:14
我目的是要扩增出来后  做蛋白 比单纯的编码区长一些  那样能得到目的蛋白吗...

15楼: Originally posted by 547star at 2013-07-04 19:31:38
没问题。翻译的时候到终止密码子就结束了。天然的基因都能表达，你不过是扩增出来克隆到表达载体表达而已。克隆表达时要注意读码框正确。抽空补一下分子生物学的基础知识吧，欠缺太多，会有各种问题，这个时候读书 ...

12楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-07-04 18:56:45
大侠帮忙解决一下吧  我已经整了几天了 ...

17楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-07-04 21:13:10
不好意思，刚才有事出去了，解决了吗？...

18楼: Originally posted by 小love肖 at 2013-07-05 12:38:07
你的序列中GC含量太少了，上下游引物中GC含量更少，估计不太好扩增，你可以选择载体上的序列设计引物先扩增，然后再酶切下来你要的序列再克隆就行了，下面是我设计的引物，有点长，但是也没办法，你可以看看
上游引 ...