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ljj0720

银虫 (正式写手)

[求助] 克隆表达 引物设计

急急急  现在我知道某基因的全长 要扩增全长 引物怎么设计啊  网上有这样说的:


1、从你的全长基因的正义链直接数出16-20个碱基(从ATG开始),然后在它的5‘端加上游酶切位点,如果需要的话加上保护碱基。
2、从你的全长基因的反义链从5’-3‘端直接数出16-20个碱基,后在它的5‘端加上游酶切位点,如果需要的话加上保护碱基。
这样引物就设计好了。
注意:上下游的酶切位点不要设计反了。



难道不用软件分析吗

[ Last edited by 1949stone on 2013-7-5 at 09:46 ]
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小love肖

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-05 14:56:18
你的序列中GC含量太少了,上下游引物中GC含量更少,估计不太好扩增,你可以选择载体上的序列设计引物先扩增,然后再酶切下来你要的序列再克隆就行了,下面是我设计的引物,有点长,但是也没办法,你可以看看
上游引物   (保护碱基)酶切位点+GCCGCCACC+atgagttttaggataaatac(5‘-3’)
下游引物      (保护碱基)酶切位点+ TTATTGTAAAAGCCTTAAGAC(5‘-3’)
GC含量在30左右,Tm值为40
18楼2013-07-05 12:38:07
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bleach060452

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
能不用软件么,开玩笑~~
岂能尽如人意,但求无愧我心
2楼2013-07-04 15:51:26
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bleach060452

新虫 (小有名气)

他只是极其简单的一说,复杂的地方一点没提,优化才是最恶心的~~必须有软件辅助的
岂能尽如人意,但求无愧我心
3楼2013-07-04 15:56:31
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refreshing11

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-04 17:02:15
分析的余地比较小,因为你的序列已经固定,两端的序列都要扩增出来,没法选择了,不过如果不得已,可以考虑简并引物的使用。希望有帮助

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-07-04 15:56:37
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