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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 测某种化合物对特定酶的抑制作用
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)

[求助] 测某种化合物对特定酶的抑制作用

最近在做酶活抑制实验，在160uM抑制剂浓度下反应10分钟后测吸光值，计算得抑制率为42%，2分钟后我又测了一次吸光值，计算得抑制率变为41%,再2分钟后我又测了一次吸光值，抑制率变为40%，之后每隔2分钟测一次，得到的抑制率依次为：39%，35%，34%。在其他抑制剂浓度下也有同样的趋势出现。我的吸光值都是在2-3.5之间的。
请教各位高手，出现这种情况是什么原因，做酶活抑制试验需要满足什么条件才行。
谢谢谢谢谢谢！！！！！！
如果不方便回答的话，求大师给个链接，我自己看也行，或者给篇文献的标题，我自己找来看看也行！！
谢谢谢谢谢谢！！！！！！
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1楼 2013-07-04 15:04:48
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MaoNaiJi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-05 07:52:40
拉风蜗牛王: 金币+6, ★★★很有帮助 2013-07-05 13:54:37
首先 吸光值在0.1-0.9之间才可靠 仪器读数是有一个可信范围的 超过这个范围的读数无意义 请稀释酶浓度
再者 延长时间 吸光值会下降 说明这个时候反应没到平衡 建议延长反应时间 或者所有的样品都在统一的时间点测定
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2楼2013-07-05 00:19:43
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MaoNaiJi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-05 07:53:01
拉风蜗牛王: 金币+6, ★★★很有帮助 2013-07-07 18:32:03
控制吸光值读数 可以稀释酶液 增加反应体系的体积 或者缩短反应时间
吸光值之后下降 还有可能是生成物不稳定
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3楼2013-07-05 00:22:31
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)
谢谢您的帮助！！！！！我的吸光值并没有下降，是计算得到的抑制率下降了，抑制率=（A空白组-A抑制剂组）/A空白组。空白组是指只加酶和底物但是不加抑制剂。
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4楼2013-07-05 13:38:59
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)
我现在纳闷的就是，为什么随着反应时间的变化，酶的抑制率也在发生变化，这个没道理的啊，这样的话那到底反应多长时间时测抑制率才合理呢？
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5楼2013-07-05 13:53:59
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by MaoNaiJi at 2013-07-05 00:22:31
控制吸光值读数 可以稀释酶液 增加反应体系的体积 或者缩短反应时间
吸光值之后下降 还有可能是生成物不稳定

能帮我解答下以下的问题吗？
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6楼2013-07-07 18:32:48
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MaoNaiJi

金虫 (正式写手)
建议你对空白做个时间扫描 看生成物颜色是否随时间延长而改变 多长时间达到最大值 之后基本稳定还是明显下降 然后选择合适的测定时间
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7楼2013-07-08 00:57:41
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by MaoNaiJi at 2013-07-08 00:57:41
建议你对空白做个时间扫描 看生成物颜色是否随时间延长而改变 多长时间达到最大值 之后基本稳定还是明显下降 然后选择合适的测定时间

恩，有空白，随着反应时间的延长，吸光值不断增大。那怎么样的时间才叫合适？合适的原因是什么？达到稳定了的时间为什么就是合适？我的目的是测抑制率。
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8楼2013-07-08 20:06:29
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MaoNaiJi

金虫 (正式写手)
你没有明白我的用意...
那你加抑制剂后再测下时间曲线 以后测的话 时间就选在吸光值未下降的那一段
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9楼2013-07-10 21:45:54
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by MaoNaiJi at 2013-07-10 21:45:54
你没有明白我的用意...
那你加抑制剂后再测下时间曲线 以后测的话 时间就选在吸光值未下降的那一段

我现在并没有出现吸光值下降这种情况，吸光值一直都是上升的。另外，为什么不能取上升的时候？
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10楼2013-07-10 22:27:25
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