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很奇怪的酶切连接问题
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| 我分别双酶切表达载体和T-载体，再分别回收目的片段（16000bp和1100bp），在连接热击转化，挑取单克隆，pcr验证，挑阳性测序，测序结果正确（因为表达载体没有通用引物，所以就用的自己的目的片段的引物测序，据师兄说这样测序开头和结尾是不准确的，中间的序列才有说服力，测序的结果表明中间的序列确实是我目的片段上的序列，因此我觉得我连接成功了，这样理解不知对不对？），可奇怪的是：我再双酶切重组质粒时却切不下来了，试了好几次，也试着改变酶切体系，可还是不行，没有目的条带，只有质粒一条带，求解。。。。。。。。 |
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