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卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)

[求助] 欲PCR扩增4200bp左右的目的片段,一直得不到目的条带,求高人指教!已有2人参与

本人欲PCR扩增一4200bp左右的目的基因片段,用过TaKaRa的LA酶、HS Taq酶,用过全式金的FastPfu Fly DNA Polymerase均无目的条带,很是郁闷,跑电泳时用0.5%的胶,100V跑25min,但加样孔处一直有很亮的一团,请高手指点,我怎样才能扩增出目的条带??
欲PCR扩增4200bp左右的目的片段,一直得不到目的条带,求高人指教!
小木虫.jpg

[ Last edited by 卓尔不凡2012 on 2013-6-22 at 20:02 ]
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
卓尔不凡2012(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-23 12:35:02
减少模板用量
添加适量镁离子(用量参考相应说明书)
5楼2013-06-23 10:44:30
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overhalfmoon

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
卓尔不凡2012(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-23 12:34:06
卓尔不凡2012: 金币+1 2013-06-24 15:43:10
试试少一点模板,或者稀释你的模板。先稀释20-50倍试试
2楼2013-06-22 21:25:52
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卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by overhalfmoon at 2013-06-22 21:25:52
试试少一点模板,或者稀释你的模板。先稀释20-50倍试试

20微升的体系,模板用了2.5微升,我是按照TaKaRa的LA Taq说明书加的。
3楼2013-06-22 21:40:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-23 12:34:17
你的模板定浓度了吗?PCR能看到模板说明模板用量太大了。
4楼2013-06-23 01:34:35
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