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卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)

[求助] 欲PCR扩增4200bp左右的目的片段,一直得不到目的条带,求高人指教!已有2人参与

本人欲PCR扩增一4200bp左右的目的基因片段,用过TaKaRa的LA酶、HS Taq酶,用过全式金的FastPfu Fly DNA Polymerase均无目的条带,很是郁闷,跑电泳时用0.5%的胶,100V跑25min,但加样孔处一直有很亮的一团,请高手指点,我怎样才能扩增出目的条带??
欲PCR扩增4200bp左右的目的片段,一直得不到目的条带,求高人指教!
小木虫.jpg

[ Last edited by 卓尔不凡2012 on 2013-6-22 at 20:02 ]
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alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-21 07:55:20
首先,你需要查下你的酶是否适合4kbp的片断pcr
再者,你可以调整你的反应体系,量的方面和正常的pcr没有区别,但是在小的方面,反应条件的设定要根据你的片断大小调整各个反应阶段的时间——变性、延伸等,通常第一次会很淡,你再优化一下就可以了
修身、齐家、治国、平天下
22楼2013-07-20 18:45:45
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