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dearestff

金虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 风信子1340 at 2013-06-22 08:51:22
我也做过类似的试验,碰到过相似的问题,而且我的柱子保留时间每天都有0.5min~1min的差别,主要是甲醇-水用醋酸调节PH时,PH容易波动,醋酸容易挥发,调好后最好要多测几次确认不在波动;此外甲醇和水的用称量要准确 ...

谢谢!我的是隔了一周没做,做的时候突然发现峰1、2min多就出来了,肯定不是误差的问题。发现过滤白头挺脏,而且柱前压力挺大,换个过滤白头试试
21楼2013-06-22 16:13:50
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st.nova2012

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议重配一下流动相
对pH有要求的色谱条件,经常会因为pH不一致,发生保留性质的改变
22楼2013-06-23 12:19:29
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dm2616

新虫 (初入文坛)


西湖醉鱼: 金币+1, 欢迎常来分析版 2013-06-26 15:16:54
楼主,您好!首先我觉得您应该良好的液相分析习惯,这很重要,尤其是条件的详细记录,设备的维护等等!
从11min出峰到昨天突然提前“到”1min多出峰,可以判断,目标物质基本没有保留,原因可能有2其一色谱柱坏,不具保留功能,那么其他乱七八糟的峰也应一起出来;其二,可能流动相发生较大的变化,尤其是采用的超强洗脱能力的流动相才会1min出峰;如果您搞错了是提前了1min,那么就是10min左右出峰,那就很正常了。重复性较好,说明气泡等问题不大,峰面积变化大有可能是流动相或者是标样的变化引起。
因此,我推断最有可能您的流动相与之前有变化,(pH越小出峰越晚,您能确认pH没有问题吗,您能确认水和甲醇用的是统一品牌吗?),其次,确认您的标样是否有问题,是否因时间发送降解等现象
23楼2013-06-24 15:30:56
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hyp8023

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你加了pH缓冲剂没?如果柱子洗干净了的话,肯定是流动相的问题了。一般温度对保留时间影响不大,还有就是 压力变大了,会不会是流动相没过滤,有杂质留在机子里~~~
24楼2013-06-24 17:18:12
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import12345

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
18楼: Originally posted by dearestff at 2013-06-22 10:04:24
谢谢!不过我的保留时间从11min提前到2min多,而且柱前压力就挺大,猜测应该是过滤白头堵了,换个新的试试,不知道能不能清理。...

异丙醇超声15min,纯化水超声15min
fight
25楼2013-06-25 00:06:11
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import12345

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
23楼: Originally posted by dm2616 at 2013-06-24 15:30:56
楼主,您好!首先我觉得您应该良好的液相分析习惯,这很重要,尤其是条件的详细记录,设备的维护等等!
从11min出峰到昨天突然提前“到”1min多出峰,可以判断,目标物质基本没有保留,原因可能有2其一色谱柱坏,不 ...

为啥ph越小出峰时间越晚?这个应该和甲醇的量有关吧
fight
26楼2013-06-25 00:08:03
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dearestff

金虫 (小有名气)

引用回帖:
23楼: Originally posted by dm2616 at 2013-06-24 15:30:56
楼主,您好!首先我觉得您应该良好的液相分析习惯,这很重要,尤其是条件的详细记录,设备的维护等等!
从11min出峰到昨天突然提前“到”1min多出峰,可以判断,目标物质基本没有保留,原因可能有2其一色谱柱坏,不 ...

谢谢!刚开始是1min多就出峰了'冲了几天柱子'现在是2、3min左右出峰'而且这个时间附近有很多小杂峰'之后就恢复一直走稳'刚用纯甲醇冲的时候进了一针纯甲醇'还是有这些杂峰和一个较大的峰(峰面积100左右)'是不是柱子坏了'我也很希望是流动相的问题不是我把柱子搞坏了'不然老板要骂死我啊。。。但是流动相配比和以前的完全一样啊'调pH也没加缓冲液'就只是用醋酸调了一下'之前也是这样做的都没问题'我越来越怀疑是柱子坏了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
27楼2013-06-25 11:50:04
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dearestff

金虫 (小有名气)

引用回帖:
22楼: Originally posted by st.nova2012 at 2013-06-23 12:19:29
建议重配一下流动相
对pH有要求的色谱条件,经常会因为pH不一致,发生保留性质的改变

谢谢'流动相重配过n遍了。。。pH不会影响这么大吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
28楼2013-06-25 11:52:13
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py1986830

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
西湖醉鱼: 金币+1, 欢迎常来分析版 2013-06-26 15:17:14
dearestff: 金币+5 2013-07-08 11:52:06
首先,先确定你的流动相配的没有问题,比如:用的醋酸没问题,调pH值也比较准确,要知道对于这种流动相条件,pH对其影响是比较灵敏。
第二 看看色谱图中峰形是否正常,有没有拖尾、鬼峰之类的峰形出现,如果有说明色谱柱柱效下降,需要清洗色谱柱
第三 在清洗色谱柱的时候,不能只用5%的甲醇冲洗,这样冲洗,色谱柱是冲洗不干净的,需要甲醇比例的变化的梯度洗脱,柱子方能冲洗干净
以上是我能想到的几点,看看对你有没有用
29楼2013-06-26 14:28:20
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jgy2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

看一眼柱子品牌是不是迪马家,迪马家的色谱柱有个bug就是流动相水相不能超过80%,水相过高用一段时间就易出现疏水塌陷,造成不保留的现象,你的流动相正好卡线,极易引起柱疏水塌陷,用纯有机相冲冲就好了,水冲最好用25%的甲醇水
30楼2013-06-26 15:13:39
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