应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T4酶切连接求助！
52/1返回列表
查看: 1983  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

melisax

新虫 (初入文坛)

[求助] T4酶切连接求助！

最近在做酶切连接，我用的载体上的多克隆位点，SALI和HIND3酶切切开之后与目的片段连接，目的片段也是用同样的酶从T载上切下来的，载体和片段都做了胶回收也跑过胶看过亮度了，浓度还可以的，然后按1比10体系加，T4连接过夜。我做了好久了平板上一点也不长。确认酶什么的都是没有问题的别人做都很正常，感受态我也换过几次也不长，用商业化的感受态也不长，平板抗生素也都是没有问题的。现在抓狂了，到底问题出在哪里都不知道，求大神解答！谢谢！！！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-06-19 23:48:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ivyvampire

新虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by melisax at 2013-06-25 23:14:24
不是有金属浴么？或者制冷水浴锅都可以
...

都木有，金属浴是个神马
赞一下 回复此楼
16楼2013-06-26 09:15:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

melisax

新虫 (初入文坛)
一开始我怀疑载体自连或者酶切不干净，可是这样也起码会长假阳性吧，可是我的平板就是空的什么都没有。我的片段测过序了，酶切位点没有问题。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2013-06-19 23:50:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
melisax(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-20 09:06:26
转化时要多做点对照便于分析。关于T4连接酶的对照，一般有载体双酶切自连、单酶切自连的对照。感受态的对照最好也做一下，就是转个同样抗性的质粒，确定转化步骤和操作没有问题。
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-20 00:47:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是呀！做不出来最好做一下对照！
试试超感吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-20 06:05:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-31 00:21 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 15/750 2026-08-31 00:10 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +5 雨打竹帘 2026-08-30 9/450 2026-08-30 22:23 by 余韵清
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 18:53 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:50 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:40 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 18:20 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 17:47 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 06:10 by ZPa0EcMwuECS
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 05:48 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭