应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T4酶切连接求助！
52/1返回列表
查看: 1988  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

melisax

新虫 (初入文坛)

[求助] T4酶切连接求助！

最近在做酶切连接，我用的载体上的多克隆位点，SALI和HIND3酶切切开之后与目的片段连接，目的片段也是用同样的酶从T载上切下来的，载体和片段都做了胶回收也跑过胶看过亮度了，浓度还可以的，然后按1比10体系加，T4连接过夜。我做了好久了平板上一点也不长。确认酶什么的都是没有问题的别人做都很正常，感受态我也换过几次也不长，用商业化的感受态也不长，平板抗生素也都是没有问题的。现在抓狂了，到底问题出在哪里都不知道，求大神解答！谢谢！！！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-06-19 23:48:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melisax

新虫 (初入文坛)
缓冲液也是新配制的，应该没有问题，我问过别人用的都挺正常的，还是应该是浓度问题吧。。。可是我按载体1.5 片段7 这么加应该够了吧，太浓了？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
13楼2013-06-23 09:48:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

melisax

新虫 (初入文坛)
一开始我怀疑载体自连或者酶切不干净，可是这样也起码会长假阳性吧，可是我的平板就是空的什么都没有。我的片段测过序了，酶切位点没有问题。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2013-06-19 23:50:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
melisax(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-20 09:06:26
转化时要多做点对照便于分析。关于T4连接酶的对照，一般有载体双酶切自连、单酶切自连的对照。感受态的对照最好也做一下，就是转个同样抗性的质粒，确定转化步骤和操作没有问题。
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-20 00:47:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是呀！做不出来最好做一下对照！
试试超感吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-20 06:05:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-30 22:24 by xiangy672
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +5 雨打竹帘 2026-08-30 9/450 2026-08-30 22:23 by 余韵清
[基金申请] 能否申诉？ +4 echo8914667 2026-08-30 5/250 2026-08-30 21:11 by echo8914667
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭