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为什么突变体测Km和Ki测不出来，线性很乱，而同样测野生型的是没问题的
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| Sample Text突变体是一个碱基的突变，突变的氨基酸怀疑是它的活性基团 |
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【答案】应助回帖
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我好像看到这方面有的文献报道，直接说把活性中心位点突变了就没有活性了，这样说明这个位点确实是活性中心。不知道你的这个突变掉了还有多少活性，或者你们推测的反应机理是不是只有这一个活性中心位点。一般来说，如果突变活性中心附近的氨基酸残基，如果活性有成百上千倍的降低（注意，不是完全没有活性），这个时候要测其动力学参数，需要浓缩蛋白，测量的反应体系酶量加大，同时要调整反应体系及反应时间，这样才能得到比较合理的初始反应速度，来拟合米氏方程。 |
4楼2013-06-20 16:13:57
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6楼2013-06-21 21:42:46