应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么突变体测Km和Ki测不出来，线性很乱，而同样测野生型的是没问题的
61/1返回列表
查看: 1001  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

crjtina

银虫 (小有名气)

[求助] 为什么突变体测Km和Ki测不出来，线性很乱，而同样测野生型的是没问题的

Sample Text突变体是一个碱基的突变，突变的氨基酸怀疑是它的活性基团
回复此楼

» 猜你喜欢
赠人玫瑰，手有余香。
1楼 2013-06-19 15:04:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

千年一雨

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
crjtina: 金币+3, ★有帮助, 非常感谢，但如何解决呢，浓缩还是纯化才能得到好的线性，因为是想用数据证明那是它的活性中心 2013-06-20 14:30:05
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-20 22:16:14
应该是突变在活性中心，致使突变体活性有了极大地降低，相应测到的反应速度很小，线性化拟合就很差了！
赞一下 回复此楼
2楼2013-06-19 23:28:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crjtina

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 千年一雨 at 2013-06-19 23:28:49
应该是突变在活性中心，致使突变体活性有了极大地降低，相应测到的反应速度很小，线性化拟合就很差了！

非常感谢，那么请问如何提高呢，是浓缩还是纯化，或是别的方法能得到相应好的线性，因为就是想用数据说明那是活性中心
赞一下 回复此楼
赠人玫瑰，手有余香。
3楼2013-06-20 14:28:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

千年一雨

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-20 22:16:30
crjtina: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-06-21 10:11:57
引用回帖:
3楼: Originally posted by crjtina at 2013-06-20 14:28:42
非常感谢，那么请问如何提高呢，是浓缩还是纯化，或是别的方法能得到相应好的线性，因为就是想用数据说明那是活性中心...

我好像看到这方面有的文献报道，直接说把活性中心位点突变了就没有活性了，这样说明这个位点确实是活性中心。不知道你的这个突变掉了还有多少活性，或者你们推测的反应机理是不是只有这一个活性中心位点。一般来说，如果突变活性中心附近的氨基酸残基，如果活性有成百上千倍的降低（注意，不是完全没有活性），这个时候要测其动力学参数，需要浓缩蛋白，测量的反应体系酶量加大，同时要调整反应体系及反应时间，这样才能得到比较合理的初始反应速度，来拟合米氏方程。
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-20 16:13:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crjtina

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 千年一雨 at 2013-06-20 16:13:57
我好像看到这方面有的文献报道，直接说把活性中心位点突变了就没有活性了，这样说明这个位点确实是活性中心。不知道你的这个突变掉了还有多少活性，或者你们推测的反应机理是不是只有这一个活性中心位点。一般来说 ...

真的很谢谢您，我才做这方面的工作，本来这个酶的突变的方向文献都很少还没找到有关此类的，您能给我发一篇类似文献参考一下吗
还有，您说需要浓缩，我之前是用粗酶测的，但是野生型粗酶就很好测，那浓缩的粗酶突变体需要进一步纯化吗
赞一下 回复此楼
赠人玫瑰，手有余香。
5楼2013-06-21 10:11:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

千年一雨

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by crjtina at 2013-06-21 10:11:07
真的很谢谢您，我才做这方面的工作，本来这个酶的突变的方向文献都很少还没找到有关此类的，您能给我发一篇类似文献参考一下吗
还有，您说需要浓缩，我之前是用粗酶测的，但是野生型粗酶就很好测，那浓缩的粗酶突 ...

你找一些新解出来的蛋白质结构晶体的相关文章，或者一些发现酶的催化机理的文章看看。另外，测酶的动力学参数，应该是用纯酶的。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2013-06-21 21:42:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 crjtina 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 05:45 by gy1nBQXYQJqL
[基金申请] 国自然评审意见 +11 wangmingqi 2026-08-28 15/750 2026-08-29 00:17 by fangyl2005
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭