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lyaikele

金虫 (小有名气)

[求助] 分子生物学小白求助序列处理问题

小弟现在是拿环境中真核浮游植物的18S 基因做生物多样性,由于没有分子生物学的背景,基本属于小白。现在拿到了一些数据,但是不懂得处理,一些生物信息学的软件也不会用,实在愁人。望小木虫里的众大神解救

我主要的问题如下:
1、我做生物多样性,拿到序列之后的处理流程:序列处理-划分OTU-做进化树,这个想法对么?
2、关于序列处理,我拿到一批序列后的处理思路应该是怎样?(之前没有处理过,什么都不懂,所以拿到序列之后一点想法都没有,不知道该干嘛...还望大神们提点)
3、有的序列是正向的有的是反向的,如何确定哪些序列是反向的(还有会不会有互补的序列?)?如果是反向的,那么比对的时候如何倒过来?用什么软件?怎么操作(看了半天的使用说明书还是很茫然,只有请教各位大神了)?(我现在装的软件有BioEdit,Mega 5,primer premier 5,Clustal X2,以下同)
4、序列比对的时候要把PCR的引物加进去一起比对? 添加进去的引物序列是实际引物的互补序列?比对序列的时候把不同序列中的相同的碱基序列对应起来,这样做是为了做什么?比对完之后下一步又该做什么?
5、如何划分OTU?怎么操作?在划分OTU之前先要做好哪些准备工作?
6、稀释曲线怎么做?
7、检测和去除chimera是指什么?做什么用的?怎么做?
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白话八股

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by lyaikele at 2013-06-17 08:45:20
16S 做真核的还是原核的啊?
那序列的处理应该有相同之处吧?
能不能教我一点啊......

16S是原核的~18S用于真核,我现在仅会用拿到的序列BLAST后用软件作进化树
最爱的那个人会出现在身边。
6楼2013-06-19 21:39:46
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lyaikele

金虫 (小有名气)

为什么都没人回啊...
2楼2013-06-16 19:22:53
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lyaikele

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 白话八股 at 2013-06-17 00:36:53
我做的16SrDNA

16S 做真核的还是原核的啊?
那序列的处理应该有相同之处吧?
能不能教我一点啊...
4楼2013-06-17 08:45:20
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wujiangjack

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2013-06-20 08:29:13
1949stone: 金币+1, 同意 2013-06-20 08:29:25
有序列了就到NCBI比对一下,马上就知道正反向了,同时可以看到序列和哪些基因亲缘关系比较相近,多查这方面的基因,然后做进化树就可以了。
5楼2013-06-17 13:58:12
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