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xingxingkids

金虫 (著名写手)

[求助] 关于合成的引物DNA序列在260nm处没有吸收峰,是怎么回事??

合成的引物,经过离心溶解后,进行紫外测试,结果在260nm处竟然没有吸收峰,请问可能是什么原因,谢谢!!
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
xingxingkids: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-06-08 18:03:31
xingxingkids(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-06-09 09:34:27
是不是你的样品浓度太大了,这时紫外光谱可能测不来。如果你的样品中可能混有其他的大分子DNA则要用钼酸铵-过氯酸沉淀剂(钼酸铵0.25%,过氯酸2.5%)沉淀离心后取上清液测定紫外260nm吸收峰。钼酸铵-过氯酸沉淀剂(钼酸铵0.25%,过氯酸2.5%)制备方法:取3.6mL70%过氯酸和0.25g钼酸铵溶于96.4mL蒸馏水。
3楼2013-06-08 17:45:14
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是离心后剪切力过大,粉碎了DNA,或者DNA被水解了,你用电泳测试一下。
2楼2013-06-08 17:30:19
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xingxingkids

金虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-08 17:30:19
是不是离心后剪切力过大,粉碎了DNA,或者DNA被水解了,你用电泳测试一下。

请问长时间离心会对DNA有什么影响吗??我是先用4000r离心5min,后来不放心又用10000r离心了5min,然后就加TE溶液溶解了。
4楼2013-06-08 17:55:32
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xingxingkids

金虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-08 17:45:14
是不是你的样品浓度太大了,这时紫外光谱可能测不来。如果你的样品中可能混有其他的大分子DNA则要用钼酸铵-过氯酸沉淀剂(钼酸铵0.25%,过氯酸2.5%)沉淀离心后取上清液测定紫外260nm吸收峰。钼酸铵-过氯酸沉淀剂(钼 ...

先谢谢您。样品浓度大概在10 的负7次方左右,不知道这样浓度算不算太大?奇怪的是在205、340、345nm登处竟然出峰了。
下面是测试的紫外光谱图。
关于合成的引物DNA序列在260nm处没有吸收峰,是怎么回事??
RRZ5V~4TM0EO9`M10@15(ER.jpg

5楼2013-06-08 18:02:26
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