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类囊体提取，大神帮帮忙，各位路过虫友看看帮帮忙，
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各位大神有没有做过提取苔藓类或者是藻类的类囊体的？救命救命啊……我查阅很多文献，发现大多都是提取高等植物如菠菜、拟南芥、大麦、水稻什么的，而且方法大概都差不多。然后我按提取拟南芥类囊体的方法提取苔藓类植物的类囊体膜和PSII颗粒，然后跑蛋白胶SDS和Western检测，发现都没有相应条带。 我做了接近一个多月了，几乎天天做，每个步骤也都有不断调整，但是情况还是不容乐观，老板又天天问进展，想死的心都有了。各位大神帮帮忙吧，是因为我提取的protocol不适用于低等植物的提取还是什么原因呢？各位大神有没有做过这方面的嘛，帮帮忙吧，能不能分享下您们的方法呢？拜谢！！ 补充下我的protocl: A液isolation buffer (50 mm Hepes-KOH 330 mm Sorbitol 2 mm EDTA 1 mm MgCl2 5 mm 抗坏血酸 0.05% BSA 10 mm NaF) B液低渗溶胀缓冲液(50 mm Hepes-KOH 5 mm Sorbitol 10 mm NaF) C液storage buffer （50 mm Hepes-KOH 100 mm Sorbitol 10 mm MgCl2 10 mm NaF ) 步骤： 浸洗后，剪成碎片，加入３倍体积预冷的isolation buffer，用预冷的杵和研钵研成匀浆。匀浆液通过两层尼龙布过滤，２０００ｇ,4°C，离心5min。弃去上清液，沉淀用isolation buffer重悬。重悬液500g，4°C离心20s,去除沉淀。上清液2000g, 4°C，离心5min.所得沉淀即为叶绿体沉淀。叶绿体沉淀重悬于B buffer以便进行低渗溶胀后，3000g, 4°C，离心10min以分离得到类囊体膜沉淀。（沉淀存储于storage buffer中。叶绿体含量用80%丙酮法-分光光度计法测定测定。得到的类囊体膜沉淀要么立即使用，或者是在液N2冷冻后分装在-80°C后备用。 （整个过程需低温避光） |
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