| 查看: 2104 | 回复: 5 | ||
[求助]
类囊体提取，大神帮帮忙，各位路过虫友看看帮帮忙，
|
|
各位大神有没有做过提取苔藓类或者是藻类的类囊体的？救命救命啊……我查阅很多文献，发现大多都是提取高等植物如菠菜、拟南芥、大麦、水稻什么的，而且方法大概都差不多。然后我按提取拟南芥类囊体的方法提取苔藓类植物的类囊体膜和PSII颗粒，然后跑蛋白胶SDS和Western检测，发现都没有相应条带。 我做了接近一个多月了，几乎天天做，每个步骤也都有不断调整，但是情况还是不容乐观，老板又天天问进展，想死的心都有了。各位大神帮帮忙吧，是因为我提取的protocol不适用于低等植物的提取还是什么原因呢？各位大神有没有做过这方面的嘛，帮帮忙吧，能不能分享下您们的方法呢？拜谢！！ 补充下我的protocl: A液isolation buffer (50 mm Hepes-KOH 330 mm Sorbitol 2 mm EDTA 1 mm MgCl2 5 mm 抗坏血酸 0.05% BSA 10 mm NaF) B液低渗溶胀缓冲液(50 mm Hepes-KOH 5 mm Sorbitol 10 mm NaF) C液storage buffer （50 mm Hepes-KOH 100 mm Sorbitol 10 mm MgCl2 10 mm NaF ) 步骤： 浸洗后，剪成碎片，加入３倍体积预冷的isolation buffer，用预冷的杵和研钵研成匀浆。匀浆液通过两层尼龙布过滤，２０００ｇ,4°C，离心5min。弃去上清液，沉淀用isolation buffer重悬。重悬液500g，4°C离心20s,去除沉淀。上清液2000g, 4°C，离心5min.所得沉淀即为叶绿体沉淀。叶绿体沉淀重悬于B buffer以便进行低渗溶胀后，3000g, 4°C，离心10min以分离得到类囊体膜沉淀。（沉淀存储于storage buffer中。叶绿体含量用80%丙酮法-分光光度计法测定测定。得到的类囊体膜沉淀要么立即使用，或者是在液N2冷冻后分装在-80°C后备用。 （整个过程需低温避光） |
回复此楼» 猜你喜欢
可以准确的通过filecode判断基金中还是不中。
已经有15人回复
-
感觉普通人已经没办法玩了，躺平是唯一的出路。
已经有26人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有109人回复
-
江苏省优青门槛
已经有20人回复
-
心好累。今年我们部门提交了18个项目。中了11了，可惜我的又挂了
已经有10人回复
-
面上项目计划书
已经有7人回复
-
面上项目计划书附件
已经有9人回复
-
面上项目计划书系统状态
已经有18人回复
-
NSFC-UNEP（与联合国环境规划署）合作项目
已经有33人回复
-
和伊朗人合作
已经有32人回复
-
江苏省自然基金
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 金棒合了一个月都还没出来，请各路大神帮帮忙
已经有20人回复
- 有关酰氯化问题，急求，大神帮帮忙啊
已经有7人回复
- 求翻译英语句子中的一个单词！各位大神帮帮忙，谢谢啦！
已经有2人回复
- IEICE的文章哪里可以下载？请虫友帮帮忙，帮我下篇文章
已经有11人回复
- 酶活力单位UN是什么意思呢？请各位帮帮忙，谢谢啦
已经有12人回复
- 请问各位知道的虫友帮帮忙：橡胶和塑料那个工作环境好点呢？
已经有18人回复
- 哪里可以买到聚丙烯纤维布，各位帮帮忙吧。。。
已经有5人回复
- 各位帮帮忙，看看是什么断口
已经有9人回复
- 本人做毕业论文 望各位虫友帮帮忙
已经有8人回复
- 英语翻译，各位大神帮帮忙！
已经有3人回复
- 虫友帮帮忙，怎么跟领导说呢
已经有8人回复
- 同学的课程论文摘要，明天早上要交的。。。急。。。各位帮帮帮忙哈。。。
已经有2人回复
- 【讨论】急求各位大虾，帮帮忙
已经有3人回复
- 简历应该怎么写，找过工作的虫友帮帮忙
已经有9人回复
- 有投过Metallurgical and Materials Transactions A 的虫友帮帮忙
已经有11人回复
- 各位大侠帮帮忙吧
已经有11人回复
pissor
木虫 (正式写手)
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 4629.3
- 散金: 108
- 红花: 2
- 帖子: 405
- 在线: 64.9小时
- 虫号: 524764
- 注册: 2008-03-14
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
2楼2013-06-11 22:29:34
3楼2013-06-12 11:27:26
pissor
木虫 (正式写手)
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 4629.3
- 散金: 108
- 红花: 2
- 帖子: 405
- 在线: 64.9小时
- 虫号: 524764
- 注册: 2008-03-14
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
4楼2013-06-13 15:27:55
5楼2019-04-12 14:52:39
2015031101
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 91.1
- 散金: 25
- 帖子: 45
- 在线: 18.5小时
- 虫号: 8548803
- 注册: 2018-04-17
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
6楼2020-08-15 10:18:07
