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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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louisa俊

银虫 (小有名气)

[求助] 两次qPCR结果相差太大。。。。U6 Ct值应该是多少

最近做了2次qPCR,结果相差太大。。。用的内参是U6,发现U6的数值相差太大,想请教一下U6 的Ct值究竟是多少?为什么两次实验U6的Ct值会相差那么多??还有就是引物能用DEPC水稀释吗??对引物有没有影响??谢谢
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louisa俊

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2013-06-05 07:56:58
CT值依据加入模板量,如果相差太大应该是操作的问题,最大的可能是加入模板的量不太一致,即加模板时枪头里没打干净。引物可以用灭菌水直接稀释。

恩。非常感谢。下次加样的时候,我会尽量保持一致,谢谢!!
5楼2013-06-06 09:00:28
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
louisa俊(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-05 11:42:26
CT值依据加入模板量,如果相差太大应该是操作的问题,最大的可能是加入模板的量不太一致,即加模板时枪头里没打干净。引物可以用灭菌水直接稀释。
2楼2013-06-05 07:56:58
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froess

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
louisa俊(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-05 11:42:34
首先你提出的问题有些不严谨,其实对于种属之间U6的表达量是有差异的。建议保证实验条件相同。如果你保证前后实验条件相同,那我觉得有个很严重的问题,U6在你做的实验中表达不稳定,所以导致相差太大。
3楼2013-06-05 10:37:49
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+2, 鼓励 2013-06-09 14:12:06
可以用来做内参的基因很多,到底用哪个基因做内参需要看你的模板来源,有一个专门的内参选择软件,但可以用来做内参的一般是表达量高且表达水平比较恒定的基因,你这个U6不知道符不符合条件,另外引物直接用灭菌水稀释,一点影响都没有
4楼2013-06-05 15:25:32
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