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Ljiancai

金虫 (小有名气)

[求助] 帮忙分析一下HPLC色谱图

各位大侠,最近导师让做一个类似代谢组的实验,用纯甲醇提取了水稻的粗提物,用HPLC分析,怎么跑都是只有几个峰(见附图),C8 和C18柱都用过,结果都差不多。进样程序为:用水和乙腈做为流动相,0-6min,乙腈达到流动相混合液的18%,6-15min,乙腈达到22%,15-30min,乙腈达到58%。设定254m、320nm、210nm、360hm为观测波长。实验室很久以前有师姐做过,跑出来峰还不错(见附图),苦于一直联系不上,没法交流,有哪位大侠可以指点迷津?悬赏额的所有积分啦(小虫只有金币十几枚).
帮忙分析一下HPLC色谱图
前人做的.jpg


帮忙分析一下HPLC色谱图-1
自己做的.jpg
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chamlyon

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先摸索下条件,确定流动相比例看看,要么拿树脂试试。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2013-06-03 09:29:49
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

有DAD你就看一下等高图呗
3楼2013-06-07 15:28:49
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Ljiancai

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yugijiang at 2013-06-07 15:28:49
有DAD你就看一下等高图呗

请问什么是等高图?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-06-07 23:52:00
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笑盲虫

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

1.从峰强度来看  只有210时基本上和你所谓的前人能对的上   其他的峰强度基本上都在10左右,所以样品十分存在问题 需要考虑一下  
2.从色谱条件来看,需要优化一些    开始的时候从5%开始,慢慢进行梯度洗脱,看峰数情况是否改善,可以多试几次
3   样品是用甲醇提取的  为什么最后用乙腈来做流动相呢  最好能统一
用文字走路,用行动分析
5楼2013-06-08 08:15:43
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qimingfu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我有种感觉,像是你的东西没有提取出来一样。你是用甲醇去提取水稻上的目标物吗?后面有净化过程不?我们这里经常用甲醇或乙腈去提取水稻的植株,液相色谱图应该比你的图乱的多,更像你师姐的图,会有很多杂质峰。但是你的图完全就没有表现出来,我没有做过样品能净化的这么干净的。是不是你的前处理或者仪器的某个地方存在一些问题?
6楼2013-06-08 18:15:14
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LHMZB

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

流动相需要改进,可以参考一下,中药指纹图谱的做法,另外需要dad检测器看看3d图。确定波长,此外应当试试甲醇和水不同比例的提取的不同

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7楼2013-06-08 18:41:38
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Ljiancai

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by qimingfu at 2013-06-08 18:15:14
我有种感觉,像是你的东西没有提取出来一样。你是用甲醇去提取水稻上的目标物吗?后面有净化过程不?我们这里经常用甲醇或乙腈去提取水稻的植株,液相色谱图应该比你的图乱的多,更像你师姐的图,会有很多杂质峰。但 ...

是用甲醇提水稻的代谢物,没有做过净化,如果说有净化的话那就是14000rpm离心10分钟,我觉得提取的过程应该不会有问题,因为很简单,就是用甲醇震荡离心,我也感觉机器有问题就是不知道问题在哪,依你的经验应该是哪里出了问题?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2013-06-09 00:27:35
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Ljiancai

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 笑盲虫 at 2013-06-08 08:15:43
1.从峰强度来看  只有210时基本上和你所谓的前人能对的上   其他的峰强度基本上都在10左右,所以样品十分存在问题 需要考虑一下  
2.从色谱条件来看,需要优化一些    开始的时候从5%开始,慢慢进行梯度洗脱,看峰 ...

感觉五分钟的时候是有一些没分开,但我觉得主要的问题,分析出了的物质实在是太少,不对头,觉得机器有问题,您有没有相关经验啊?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
9楼2013-06-09 07:34:11
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10楼2013-06-09 07:53:15
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