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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 帮忙分析一下HPLC色谱图
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Ljiancai

金虫 (小有名气)

[求助] 帮忙分析一下HPLC色谱图

各位大侠，最近导师让做一个类似代谢组的实验，用纯甲醇提取了水稻的粗提物，用HPLC分析，怎么跑都是只有几个峰（见附图），C8 和C18柱都用过，结果都差不多。进样程序为：用水和乙腈做为流动相，0-6min，乙腈达到流动相混合液的18％，6-15min，乙腈达到22％，15-30min，乙腈达到58％。设定254m、320nm、210nm、360hm为观测波长。实验室很久以前有师姐做过，跑出来峰还不错（见附图），苦于一直联系不上，没法交流，有哪位大侠可以指点迷津？悬赏额的所有积分啦（小虫只有金币十几枚）.
帮忙分析一下HPLC色谱图
前人做的.jpg


帮忙分析一下HPLC色谱图-1
自己做的.jpg
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1楼 2013-06-02 13:22:40
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chamlyon

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先摸索下条件，确定流动相比例看看，要么拿树脂试试。

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2楼2013-06-03 09:29:49
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

有DAD你就看一下等高图呗
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3楼2013-06-07 15:28:49
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Ljiancai

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yugijiang at 2013-06-07 15:28:49
有DAD你就看一下等高图呗

请问什么是等高图?

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4楼2013-06-07 23:52:00
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笑盲虫

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

1.从峰强度来看  只有210时基本上和你所谓的前人能对的上   其他的峰强度基本上都在10左右，所以样品十分存在问题 需要考虑一下  
2.从色谱条件来看，需要优化一些    开始的时候从5%开始，慢慢进行梯度洗脱，看峰数情况是否改善，可以多试几次
3   样品是用甲醇提取的  为什么最后用乙腈来做流动相呢  最好能统一
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用文字走路，用行动分析
5楼2013-06-08 08:15:43
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qimingfu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我有种感觉，像是你的东西没有提取出来一样。你是用甲醇去提取水稻上的目标物吗？后面有净化过程不？我们这里经常用甲醇或乙腈去提取水稻的植株，液相色谱图应该比你的图乱的多，更像你师姐的图，会有很多杂质峰。但是你的图完全就没有表现出来，我没有做过样品能净化的这么干净的。是不是你的前处理或者仪器的某个地方存在一些问题？
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6楼2013-06-08 18:15:14
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LHMZB

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

流动相需要改进，可以参考一下，中药指纹图谱的做法，另外需要dad检测器看看3d图。确定波长，此外应当试试甲醇和水不同比例的提取的不同

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7楼2013-06-08 18:41:38
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Ljiancai

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by qimingfu at 2013-06-08 18:15:14
我有种感觉，像是你的东西没有提取出来一样。你是用甲醇去提取水稻上的目标物吗？后面有净化过程不？我们这里经常用甲醇或乙腈去提取水稻的植株，液相色谱图应该比你的图乱的多，更像你师姐的图，会有很多杂质峰。但 ...

是用甲醇提水稻的代谢物,没有做过净化,如果说有净化的话那就是14000rpm离心10分钟,我觉得提取的过程应该不会有问题,因为很简单,就是用甲醇震荡离心,我也感觉机器有问题就是不知道问题在哪,依你的经验应该是哪里出了问题?

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8楼2013-06-09 00:27:35
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Ljiancai

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 笑盲虫 at 2013-06-08 08:15:43
1.从峰强度来看  只有210时基本上和你所谓的前人能对的上   其他的峰强度基本上都在10左右，所以样品十分存在问题 需要考虑一下  
2.从色谱条件来看，需要优化一些    开始的时候从5%开始，慢慢进行梯度洗脱，看峰 ...

感觉五分钟的时候是有一些没分开,但我觉得主要的问题,分析出了的物质实在是太少,不对头,觉得机器有问题,您有没有相关经验啊?

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9楼2013-06-09 07:34:11
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天天2016
10楼2013-06-09 07:53:15
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