24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1331  |  回复: 4

风诺2010

铜虫 (小有名气)

[求助] RNAi表达载体构建后,酶切切不开,怎么回事?

我有3个目的片段,分别在800,700和500左右,采用一步法与表达载体pBI-121植物表达载体连接,没有采用构建中间载体的方法, 但是我想这也不影响我的酶切吧,我用PCR检测都有结果,PCR结果都显示3个片段都连上了,但是就是酶切切不了,用同样的酶切其他的质粒都能切开,就是切这个RNAi表达载体切不了,怎么回事,求大侠指点。之后再加50金币。跪求。。。。。。。
回复此楼
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)


风诺2010(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-06-02 13:29:54
换酶切位点检验试试,不要用连接时的位点,有时候就是有这种莫名其妙的问题。
酶切验证无误之后,再测下序,妥妥的
2楼2013-06-01 21:42:32
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雄鹰飞翔

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
风诺2010: 金币+5, 有帮助 2013-06-30 17:08:20
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-30 17:18:16
个人分析,问题可能是:
1)酶切位点有问题,因为有些平末端的酶切位点,切割后在连接后就不可以在切割开来;
2)酶切体系有问题,主要是酶活性的失活,导致切不开
3)同时注意质粒的浓度
祝你好运!
3楼2013-06-06 10:44:17
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

既然都连到表达载体了,直接送测序吧,反正要测下有没有突变啊
4楼2013-06-06 13:10:15
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

治愈系柠檬茶

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
风诺2010: 金币+5 2013-06-30 17:09:25
先改用其他的酶切位点试一试 如果能切开就是内切酶的问题,不是体系不对就是位点突变,如果切不开就是你的质粒样品的问题,样品蛋白太多也会影响酶切
5楼2013-06-08 17:08:00
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 风诺2010 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 282,求调剂 +12 jggshjkkm 2026-04-09 14/700 2026-04-11 09:39 by 猪会飞
[考研] 275求调剂 +8 1624447980 2026-04-08 9/450 2026-04-11 09:34 by gong120082
[考研] 080500求调剂 +17 黄宇博 2026-04-06 17/850 2026-04-11 08:36 by zhq0425
[考研] 广东省 085601 329分求调剂 +13 Eddieddd 2026-04-10 13/650 2026-04-10 23:27 by 314126402
[考研] 22408 352分求调剂0854类 +3 努力的夏末 2026-04-09 3/150 2026-04-10 10:12 by 314126402
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH(等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 材料专硕初试分332一志愿西北工业大学, +12 故人?? 2026-04-09 12/600 2026-04-09 18:34 by Ccclqqq
[考研] 求调剂希望还是希望在山河四省附近 +3 快乐的小白鸽 2026-04-05 3/150 2026-04-09 17:36 by wp06
[考研] 考研调剂 +13 冰冰,,, 2026-04-07 13/650 2026-04-09 17:01 by Lilly_Li
[考研] 0703化学调剂325分 +13 15771691647 2026-04-04 15/750 2026-04-09 16:55 by 15771691647
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-08 12/600 2026-04-09 14:27 by rl1980
[考研] 266调剂 +8 daya sun 2026-04-07 9/450 2026-04-08 20:27 by yutian743
[考研] 一志愿华东理工085601材料工程303分求调剂 +15 a1708 2026-04-06 15/750 2026-04-08 16:23 by luoyongfeng
[考研] 264求调剂 +11 麦小叮当 2026-04-07 11/550 2026-04-08 16:05 by 一只好果子?
[考研] 315求调剂 +17 欣喜777 2026-04-04 18/900 2026-04-08 13:54 by hangsimei
[考研] 复试调剂 +5 asdasdassda 2026-04-05 5/250 2026-04-06 09:32 by dongzh2009
[考研] 348求调剂 +3 车厘子zzz 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:30 by 啵啵啵0119
[考研] 考研调剂 +3 mcbbc 2026-04-04 3/150 2026-04-05 10:03 by barlinike
[考研] 考研调剂 +11 小sun要好运 2026-04-04 11/550 2026-04-05 08:02 by qlm5820
[考研] 359求调剂 +7 hhhhaaaa$ 2026-04-04 7/350 2026-04-04 18:49 by imissbao
信息提示
请填处理意见