| 查看: 1239 | 回复: 12 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
核酸提取求助:帮忙分析下失败原因在哪?
|
|||
|
我的提取程序是200ul总消化体积,1%SDS,200ug/ml,消化过夜..... 之后是标准酚氯仿抽提.... 1%琼脂糖凝胶检测 只有最前沿有很弱的拖带出现(疑似RNA) 酚抽提后加入氯仿异戊醇(24:1)后离心后 上清很浑浊 出现大量絮状沉淀(这些是什么 蛋白质么?) , 加入氯仿异戊醇(24:1)后 好象无法混匀 始终是分层状态,这样正常么,不是要摇成乳状,再离心么 我重新提了一次还是这个样子 [ Last edited by linkfuture on 2007-10-12 at 11:58 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
290调剂生物0860
已经有16人回复
-
材料与化工300求调剂
已经有39人回复
-
求调剂
已经有19人回复
-
材料工程日语考生求调剂
已经有6人回复
-
调剂求收留
已经有21人回复
-
求调剂，985材料与化工348分
已经有6人回复
-
266求调剂，一志愿哈工程电子信息，本科获多项国奖和省奖
已经有8人回复
-
271求调剂
已经有19人回复
-
270求调剂
已经有11人回复
-
材料工程281还有调剂机会吗
已经有12人回复
guohuayin
木虫 (著名写手)
博士，副教授
- 应助: 23 (小学生)
- 金币: 3338.8
- 散金: 265
- 红花: 17
- 帖子: 1521
- 在线: 101.7小时
- 虫号: 219355
- 注册: 2006-03-13
- 性别: MM
- 专业: 植物病理学
★ ★
telomerase(金币+2,VIP+0):thanks!欢迎来多多交流！！！
telomerase(金币+2,VIP+0):thanks!欢迎来多多交流！！！
|
抽提核酸中我的做法是 首先加入等体积的苯酚：氯仿：异戊醇（体积比25：24：1），轻轻上下颠倒几次，混匀2分钟左右，12000rpm，离心10分钟； 然后吸取上清液，加入等体积的氯仿：异戊醇（体积比24:1)和上面的步骤一样，抽提一次，取上清 这两步试验可以反复三次，主要是去除蛋白质和糖类等杂质。 最后加入1/10体积的3M的醋酸钠（.PH5.3），2倍体积的无水乙醇沉淀DNA。 －20度放置30分钟，室温15000rpm,离心10分钟，沉淀用70％的乙醇洗涤去除盐分，稍微干燥后，加入适量的缓冲液溶解。－20度冰箱中保存。 [ Last edited by guohuayin on 2007-10-9 at 16:33 ] |
2楼2007-10-09 16:31:15
3楼2007-10-10 12:19:10
yangguoxing888
金虫 (小有名气)
瑜瑾
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1330.9
- 散金: 90
- 帖子: 282
- 在线: 20.8小时
- 虫号: 289916
- 注册: 2006-10-28
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2007-10-10 12:31:18
5楼2007-10-10 12:31:23
6楼2007-10-10 13:58:27
★ ★
johnsooh(金币+2,VIP+0):欢迎讨论
johnsooh(金币+2,VIP+0):欢迎讨论
|
谢谢楼上的 回复,,我的提取程序和你的差不多, 是不是我混匀时间太长 太剧烈 导致DNA断裂呢(我每次都要上下颠倒混匀10min) 氯仿异戊醇冷冻离心后为什么上清很浑浊呢 是SDS的遇冷的原因么 还是Pr ======================= 不对。 说太剧烈导致链断裂，最后使得溶液浑浊这个说法太牵强。 我还是同意楼主说的，是消化不彻底的问题。我抽提RNA时，若样本太多，导致Trizol不够用的时候，也会出现大量的浑浊。我想可能是你没有加蛋白酶K，或量太少，导致蛋白消化不彻底，所以后续加酚不能使它沉淀分层。 冷冻后，这些悬在溶液中的蛋白析出，很正常。 所以，从消化开始，再注意点。 欢迎继续探讨！ |
7楼2007-10-10 14:56:23
8楼2007-10-12 12:03:53
9楼2007-10-12 14:29:41
10楼2007-10-12 15:36:47
10